葡萄糖浓度的测定-复旦大学上海医学院生物化学精品课程.pptVIP

葡萄糖浓度的测定 实验目的及要求 掌握邻甲苯胺法法测定葡萄糖含量的原理和方法。 学会取液器及紫外分光光度计的使用。 了解葡萄糖浓度测定的意义。 实验仪器及试剂 772型分光光度计；试管；移液管；水浴锅。 邻甲苯胺试剂：硫脲2.5g，邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸溶解，在1000ml容量瓶内调至到刻度。 葡萄糖标准贮存液：10mg/ml。 葡萄糖浓度测定的意义 正常人血糖浓度在神经和激素调节下维持相对恒定。当调节因素失去平衡时出现高血糖或低血糖。 病理性高血糖见于胰岛α-细胞瘤等疾病。 病理性低血糖见于胰岛β-细胞瘤、垂体机能减退、肾上腺皮质机能减退、甲状腺机能减退、及肝坏死、糖原累积症等疾病。 测定葡萄糖浓度的方法 Folin-吴宪法： 利用葡萄糖的还原性，在与碱性铜试剂共热时，是铜离子还原成亚铜离子。 邻甲苯胺法：利用醛糖在热醋酸溶液中与苯胺类缩合生成青色的Schiff碱。 葡萄糖氧化酶法 ：利用葡萄糖氧化酶对葡萄糖的氧化作用。 邻甲苯胺法原理 葡萄糖在热醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合，生成青色的Schiff碱，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，其反应式如下： 葡萄糖标准溶液制备 取10ml容量瓶6只，分别编号①、②、③、④、⑤ ； 依次加入葡萄糖标准贮存液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml； 以H2O稀释至10ml，混匀以上