发菜中麦芽寡糖基海藻糖合成酶的抗体制备及鉴定.pdfVIP

第38卷第6期 上海师范大学学报 (自然科学版) Vo1．38．No．6 2009年 12月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) Dec．，2009 发菜中麦芽寡糖基海藻糖 合成酶的抗体制备及鉴定 沈蓉蓉，章 秀，吴双秀，何 靓，王全喜 (上海师范大学 生命与环境科学学院，上海200234) 摘 要：通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的 催化位点保守序列的片段，将该基因片段在大肠杆菌中表达，得到符合预期大小的重组蛋 白． 将该重组蛋 白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体．检测表明抗体具有较高效价．利用该抗体 检测干旱胁迫下发菜藻丝体 中该酶的表达量表 明干旱胁迫条件下该酶的表达量增加 且与海 藻糖积累量呈正相关，可能参与发菜的抗逆性保护作用． 关键词：发菜；麦芽寡糖基海藻糖合成酶；抗体；干旱胁迫 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1000-5137(2009)064)6394)6 0 引 言 发菜 (NostocflagellifoFme)是一种具有很强抗逆性的陆生藻类，能耐受很大的温差和干旱胁迫，分布 范围广，现有的文献报道它主要分布在北美和中美洲的加拿大、美国、墨西哥，非洲的摩洛哥、索马里、阿尔 及利亚、切杜曼、奥兰纳 日，欧洲的法国、捷克、斯洛伐克，前苏联的中亚、西亚和阿拉特拉新、斯大林格勒， 亚洲的蒙古和中国¨J．在中国，它分布在西部和西北部地区的8个省：新疆、青海、宁夏、甘肃、山西、陕西、 内蒙古和河北 』．发菜原产地光照强度大、时数多，降水量低，昼夜温差和年度温差大，土壤含盐量高、碱性 强．同时，发菜因其丰富的营养价值和 “发财”的谐音，深受大众的青睐，但其人工养殖技术未成熟，自然生 长周期长，不能满足人们食用的广泛需求，由于过度开采，导致其 自然栖息地生态环境严重破坏和发菜资 源严重匮乏，考虑到发菜的重要生态作用，中国政府已经明令禁止发菜的滥采和销售 J． 发菜适应极端环境机理的研究是人们广泛关注的课题，目前人们已从生理生化、生态、形态等方面 对发菜抗逆机理进行了研究，在分子机理方面的研究还有待深入．本实验室在 2007年已经在干旱胁迫 条件下测得发菜中有海藻糖的积累 J．海藻糖是 由两个葡萄糖分子通过仅，一1，1一糖苷键连接而成的 非还原性双糖，化学性质稳定_5]．很多研究证实，海藻糖在脱水条件下、高温、高渗透压、重金属及有毒 试剂等不利条件下，对蛋 白质、原生质膜、核酸等生物大分子会起到重要的保护作用，海藻糖被认为是生 物体抵御胁迫环境的应激代谢产物 ． 生物的海藻糖代谢途径中有一个途径是由麦芽寡糖基海藻糖合成酶和水解酶参与反应的，即MTS— MTH(rreY一rrez)途径．麦芽寡糖基海藻糖合成酶(Mahooligosyltrehalosesynthase)是由MTSase或者 TreY 收稿 日期：2009-07—17 基金项 目：上海市基础研究重点项 目(03JC14057)；上海市教委科研项 目(05DZ29)；上海市教育委员会重点学科建 设项 目(J50401)；上海师范大学细胞生物学校级重点学科项 目(DZLS08)． 作者简介：沈蓉蓉(1984一)，女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；王全喜 (1956一)，男，博士，上海师 范大学生命与环境科学学院教授． 通讯作者 上海师范大学学报(自然科学版) 2009拒 基因编码．研究报道很多物种 中的海藻糖代谢与其相关，如根瘤菌 (Rhizobiumsp．)、微黄短杆菌 (Brevibacterium helvolum)、硫 矿 硫 化 叶 菌 (Sulfolobusso@taricusKM)，及 结 核 分 枝 杆 菌 (Mycobacteriumtuberculosis)等．本实验室利用生物信息学的方法从Genbank中搜索已经公布氨基酸序列 的其他物种的海藻糖合成酶蛋白，用clustalx(1．83)．exe软件进行同源性对比，找到高保守区设计简并性 引物．