可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定.pdfVIP

· J实用临床医药雩志 2)【(】9年第13卷第12期 18 · ournalofClinicalMedicineinPractice … … … 可溶性 HLA—A2一IgGFe融合蛋白 在 昆虫细胞的表达及鉴定 王丽珩 ，龚卫娟 ，肖炜明 ，丁岩冰 ，田 芳 ，季明春 (1．扬州大学医学院免疫学教研室，江苏 扬州，225001； 2．扬州大学第二临床医学院 消化科 ，江苏 扬州，225001) 摘 要：目的 利用杆状病毒一昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法 首先 将可溶性HLA_A 0201和 IgG3分子Fc段的eDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa，形成重组载体 pFHT—sHLA—A 0201一IgGFc。将该重组载体转化DHIOBac大肠杆菌，sHIA—A 0201一IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒 (Bacmid)中。抽提阳 性杆粒，转染昆虫细胞Sf9，72h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞 ，96h收集细胞并裂解，SDS观察其表达。 细胞裂解液经NiNTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列，间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果 融合蛋白 不仅与HLA I类分子的构象特异性抗体 (w6／32)结合，还与羊抗人 IgG抗体结合。结论 所制备可溶性}ⅡA—A2一IgGFc融合 蛋白序列正确，并在体外形成正确空间构象。 关键词：sHLA-A2；IgGFc；融合蛋白；杆状病毒一昆虫细胞表达体系 中图分类号：R392．33 文献标识码 ：A 文章编号：1672—2353(2009)12-0018-04 Expression andldentificationofrecombinant solubleHLA——A2。IgGFcfusion protein in insectcells WANGli—heng，GONGwei-juan，XIAOwei—min ，DINGyan-bing2， TIAN fang1， JIming-ehun (1．DepartmentofImmunology，MedicalCollegeofYangzhouUniversity，Yangzhou，Jingsu，225001； 2．DepartmentofGastroenterology，SecondClinicalMedicalCollegeof YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu，225001) ABSTRACT：Obiective TogeneraterecombinantfusionproteinofsolubleH ，【A—A2andFc fragmentsofIgG in insectcellswithbaculclvirusasvectors．Methods TheoslubleHLA—A 0201 genefragmentscombinedwithFcregionofIgC wereinsertedinto3baculovirusvector，pFastHTa， toconstructtherecombinantvectorofDFHT—sHLA—A 0201-IgGFc．Nexttherecombinnatbacmid wereproducedaftertransformingtherecombinnatbaculovirusvectorintoDH10BacE．Coli．The bacmidswerethentransfectedintoinsectcellsafterpurificationfrom theDH10Bac．Seventy-two hours1ater．thesupernatantwithpa