大面积载体上隐性浸润性生物物质DNA的提取.pdfVIP

法 医 学 杂 志 2009年 12月 第 25卷 第 6期 · 459· · 经 验 交 流 · 大面积载体上隐性浸润性生物物质DNA的提取 胡 伟 ，曹 禹 ，‘蒋轶岩 ，陶建忠 ，顾丽华 ，许 炎 ’，周怀谷 (1．上海市公安局 法医物证学现场应用技术公安部重点实验室 上海市现场物证重点实验室，上海 200083；2．上海 市公安局 长宁分局 ，上海 200336) 关键词 ：法医遗传学 ；提取法；大面积载体 ；隐性浸润性生物检材 中图分类号：DF795．4 文献标志码：B doi：10．3969／j．issn．1004—5619．2009．06．018 文章编号 ：1004—5619(2009)06—4059—02 大面积载体上隐性浸润性生物检材主要指毛 巾、 ReadyAmpMT基因组 DNA纯化试剂盒 (美 国Promega 衣裤等载体上看不见摸不着的人体脱落细胞。对于反 公司)，Identifiler试剂盒 (美国AB公司) 复使用的物品，如牙刷 、鞋帽 、眼镜等 ，由于人体遗 留 I-3方法 的脱落上皮细胞较多 ，使用常规 DNA提取方法如 l_3．1QIAampDNAMiniKit改良法 (以下简称改良 Chelex一100法等往往能获得理想的检测结果l】1。 QIA法) 毛 巾、衣裤等载体面积大．人体脱落细胞分布广 ， 操作流程按照操作说明书 ，改良之处在于：(1)将 每一局部的人体脱落细胞含量极微 ，使用现有的常规 检材浸泡消化液移至 5mL一次性医用注射器 ，注射 DNA提取方法常常无法获得成功。彭建雄等 【提 出对 器内底部垫入直径约 1．5mm圆片的医用脱脂棉 ，推 于大面积载体上隐性生物性检材 ，采用吸尘器吸附人 人过滤柱中，以离心半径 5cm，8000r／min，离心 lmin； 体脱落细胞于 内置的滤纸上，然后提取滤纸上的样本 (2)为了充分收集消化液中的DNA，采用了反复过 DNA，可以明显提高 DNA检验成功率。但当载体受 柱 ，但反复过柱导致遗留在硅膜表面的抑制物相应增 潮致人体脱落细胞浸润载体后 ，即使是吸尘器法也因 加，此时，增加洗液洗涤次数。 无法吸附足够的人体脱落细胞而无法检测成功 。大面 1．3．2吸尘器吸附后标准 QIAampDNA MiniKit提 积载体上隐性浸润生物性检材的DNA检验无疑是法 取法(以下简称吸尘器法) 庭科学 DNA检验的难 点之一 。本实验对 QIAamp 使用吸尘器吸附法吸取毛巾上的人体遗 留成分 DNAMiniKit法进行改 良，在大面积载体上隐性浸 后，将滤纸剪碎 ．按照QIAampDNA MiniKit说明书 润性生物检材的DNA提取进行了探索研究。 标准提取样本 DNA 1．3．3Chelex一100法 l 材料与方法 剪取 适量检材 ．按 照 Chelex一100法提 取样本 1．1样本 DNA。 20名志愿者使用湿润的新毛 巾擦脸 ．其中 10名 1．3．4 STR分型 (5男5女)编为A组 ，按照常规力度擦脸 ：另 10名 PCR采用 Identifiler试剂盒 ．在 9700型扩增仪上 (3男 7女)编为 B组 ，用比平时明显轻 的力度擦脸 。 进行 PCR反应 ，扩增体系为 25 L。其中 A组加入 擦脸毛 巾在阴凉处晾干后备用 10 L样本 DNA，B组首先将样本 DNA置于 37℃烘 1．2主要设备和试剂 箱 内，体积浓缩至 10 L后全部加入扩增体系 。 9700型扩增仪 (美国AB公司