钙超载在高脂血症性胰腺炎中的机制研究.pdfVIP

目 录 1 钙超载在高脂血症性胰腺炎中的机制研究…………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………5 1.3 前言……………………………………………………………10 1.4 材料与方法……………………………………………………15 1.5 结果……………………………………………………………28 1.6 讨论……………………………………………………………37 1.7 结论……………………………………………………………43 1.8 参考文献………………………………………………………44 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………48 2 致谢……………………………………………………………49 3 高脂血症性胰腺炎胰腺细胞钙超载机制研究进展（综述） …………………………………………………………………50 2 钙超载在高脂血症性胰腺炎中的机制研究 摘 要 近年来随着人们饮食习惯的改变和物质生活水平的提高，高脂血症成 为继胆源性、酒精性，急性胰腺炎（AP）的常见病因。高脂血症能诱导和 加重急性胰腺炎, 但是其导致急性胰腺炎病变程度加深的机制尚不清楚。 通过对 AP 的发病机制研究表明，胰腺腺泡细胞内发生钙超载是一个重要的 触发及加重因素。存在于细胞膜表面及细胞内存储钙离子的细胞器上的钙 离子通道会因为高脂饮食而发生结构的改变从而影响细胞内信号传导过 程，引起细胞发生钙超载。但遗憾的是，钙超载在高脂血症性胰腺炎中的 研究，国外报道尚少，国内在这一领域尚属空白。该课题首次对钙超载在 大鼠高脂血症性胰腺炎中的机制进行深入的探讨。 目的：探讨钙超载在高脂血症性胰腺炎发病机制中的作用及意义，从 而为预防和治疗高脂血症性胰腺炎提供行之有效的策略。 方法：80 只雄性 SD 大鼠随机分为四组，每组 20 只。假手术组（SO 组）：普通饲料喂养，开腹后仅轻轻翻动 12 指肠及胰腺组织后关腹，不做 处理。高脂血症组（HL 组）：予以雄性 SD 大鼠高脂饲料（20%猪油，10%胆 固醇，0.1%甲基硫氧嘧啶，1%胆酸钠，68%普通饲料）喂养 4 周建立高脂血 症模型，开腹后仅轻轻翻动 12 指肠及胰腺组织后关腹，不做处理。重症急 性胰腺炎组（ SAP 组）：普通饲料喂养 4 周的大鼠，建立重症急性胰腺炎 大鼠模型。四组大鼠均在进行手术前 12 小时禁食和禁水，选用 1%戊巴比 妥钠为麻醉药物通过腹腔内注射 (3-4ml/kg)充分麻醉大鼠,手术区消毒铺 3 手术巾，于上腹部采取正中切口 2cm 进腹。牵拉十二指肠暴露出胰胆管走 行，在十二指肠降部外侧壁寻找到胆胰管开口处既十二指肠乳头处。用尖 端磨平的 1ml 空针穿刺逆行刺入胰胆管末端 1cm，用无损伤性小动脉夹在 近肝门处夹闭胰胆管近肝门端，以注射速度 0.1ml/min 往胆胰管内注入 5%Tc-Na，肉眼可见 5%Tc-Na 液体缓慢通过胆胰管均匀分布胰腺组织，当发 现药物流经的胰腺组织逐渐出现充血水肿后缓慢轻柔地拔出注射针避免针 尖损伤胰腺组织，松开放置于肝门端的动脉夹，仔细检查腹腔确认无活动 性出血及明确无其他操作所致损伤后逐层关腹，术后于大鼠腹部皮下注射 生理盐水(3ml/100g)补充手术丢失水分。高脂血症性胰腺炎组（HLP 组）： 雄性 SD 大鼠高脂饲料喂养 4 周后，以同样方法建立重症急性胰腺炎模型不 做其他处理。造模后观察大鼠的一般情况。在建立急性胰腺炎模型的时候， 均取一次穿刺成功大鼠为模型，避免反复穿刺所致其他损伤。24 小时后统 计死亡率，随即处死大鼠，肉眼观察胰腺组织出血、水肿等变化取出胰腺 组织。采用 ELISA 检测胰腺组织三磷酸肌醇（IP3），采用钙离子比色法测 定胰腺腺组织内钙 Ca 离子浓度。采用western blot 技术检测胰腺组织NF- κbP65 蛋白表达。采用 ELISA 法检测血清 TNF-a.IL-6。HE 染色对大鼠胰 腺组织学损伤进行评估。测定 SAP 组，HLP 组大鼠，腹水量。处死大鼠后， 立即穿刺心脏收集血液，检测血 TG，血淀粉酶。 结