甘草次酸对K562细胞抑制作用及机制的初步的研究.pdfVIP

J1111 1 III I I I I TIll IIIII ＼1 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………7 三、论文 前言………………………………………………………………………………8日U舌………………………”…………………………”…”……………………8 材料与方法………………………………………………………………………8 实验结果…………………………………………………………………………12 讨论……·……………………………………··…·…··…………………………17 结论…………………………………………………·…………………………··20 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………2l 五、参考文献…………………………………………………………………………22 六、附录 ¨ ¨ ～ ～ ● 2 一一 3 期 问利 砂●fL● 成 绩 ● 3O ～ ¨ ¨● ～ ● 一 一 31 综在致个 述学谢人 简介一 ¨● ～ 一 ● 32 ·中文论著摘要· 甘草次酸对K562细胞抑制作用及机制的初步研究 目 的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制及凋亡诱导作用，分 析甘草次酸对survivin、P38基因及蛋白的影响，进一步探讨其可能的抗癌机制。 方法 一、细胞培养 细胞应用1640培养基培养于37C，5％C02的恒温培养箱中。细胞隔日换液传 代1次，取处于对数生长期且台盼蓝拒染法测定活性在90％以上的细胞进行实验。 二、MTT细胞毒实验检测药物对细胞抑制作用 液稀释的12．5、50、75、100、125、150umol／L甘草次酸工作液。分别培养12h， 计算细胞抑制率，实验重复5次。 细胞增殖抑制率=(实验组．空白组)／(对照组．空白组)x100％ 三、Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变 照。Hoechst33258染色在激光共聚焦显微镜下观察细胞核形态变化。照相保存。 实验重复3次。 四、流式细胞仪分析检测细胞周期 同时设立对照组。PI单染后上机检测。调整流式细胞仪变异系数在3％一下，用cell modifit软件分析细胞周期。实验重复3次。 五、流式细胞分析仪检测细胞凋亡 24、48h。同时设立对照组，进行AnnexinV．PI双染后上流式细胞仪检测。 六、Western blot测survivin及P38蛋白 blot 收集对照组和药物作用组(甘草次酸150psnol／L作用24h细胞)，Western one测灰度值，进行结果分析。 分析软件Quantity 七、RT．PCR检测survivin及P38mRNA的表达 收集对照组和药物作用组(甘草次酸150I．trnol／L作用24”细胞，提取细胞总