乙肝病毒X蛋白对凋亡蛋白PDCD5表达的实验的研究.pdfVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 乙肝病毒 X 蛋白对凋亡蛋白 PDCD5 表达的实验研究 摘 要 [目 的] 建 立 以 及 鉴 定 转 基 因 细 胞 L02/HBX ， 在 获 得 阳 性 克 隆 细 胞 后 ， 通 过 RT-PCR,western-blot对PDCD5的mRNA与蛋白的检测，研究乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein, HBx）对凋亡蛋白PDCD5的表达。 [方 法] （1）复苏及培养L02细胞，应用G418筛选L02细胞，得到细胞最低致死浓度。 （2）建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系，并通过RT-PCR,western-blot进行 鉴定，确定HBx基因转染成功。 （3）通过Real-time PCR和Western Blot检测转染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表达; [结 果] （1）复苏并培养L02细胞，经G418筛选得知，当G418浓度在500-700ug/ml时，L02 细胞全部死亡；当G418浓度在500ug/ml以下时，L02细胞均可存活。所以经过 试验得出L02细胞的最低致死浓度为500ug/ml。 （2）将 HBx 基因转入 L02 肝细胞中，以 500ug/ml G418 筛选出转染 HBx 的阳性克隆 L02 细胞。以 RT-PCR 和 western-blot 检测 HBx mRNA 和蛋白的表达，确保成功 建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系。 （3）转染HBx基因的L02细胞中PDCD5 mRNA和蛋白中的表达水平上调。 [结 论] HBx上调凋亡蛋白PDCD5的表达进一步显示了其同细胞凋亡的关系是非常复 杂的，可能对细胞凋亡具有双重调节作用。 [关键词] 乙型肝炎病毒X蛋白；凋亡；PDCD5 4 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 The study of experiment of the influence of Hepatitis B virus X protein to Apoptosis protein PDCD5 expression Abstract Objective : To establish and cultivate the L02/HBx cytes.Testing the quantity of mRNA and protein of HBX gene in order to insure the establishing cytes is succeeful. And then, to investigate the influence of Hepatitis B virus X protein to PDCD5 expression. Methods: (1) Revive and cultivate the L02 cytes in order to obtain the minimal concentration of G418 that kill the L02 cytes. (2) The Liposomes transfect the HBx gene into the L02 cells.Then we could obtain the positive clones of L02 cytes by he lowerest concentration of G418 after two weeks.Last. The HBx mRNA was detected by RT-PCR and the protein of HBx was detected w