细胞培养的敌人内毒素和支原体.pdfVIP

细胞培养的敌人——内毒素和支原体 内毒素来源和成分 支原体的生物特性 什么是内毒素 是目前发现的最小细胞，直径约为0.13-0.18μm ·内毒素是脂多糖，为多糖、脂质和蛋白质组成的复合体 无细胞壁，不能维持固定的形态，变形能力大 ·革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分 ·因能够引起生物体发热，又称“(细菌)热原(Pyrogen)” 革兰氏染色不易着色或呈阴性 ·内毒素的单位用活性单位/毫升(EU/ml)表示 对热比较敏感，对一般抗生素不敏感 内毒素来源 ·用于配制试剂以及清洗玻璃器皿的水 ·培养基、血清以及其他培养基添加剂 ·玻璃器皿、塑料器皿 内毒素对细胞的影响 影响细胞形态 (如刺激细胞收缩) 激活细胞应激通路 抑制部分酶的活性 影响蛋白表达 (CHO细胞为例) 内毒素常用检测方法 通用的检测原理基于内毒素能够使海洋生物鲎的血细胞凝结 支原体污染在细胞培养实验室极为常见(在美国20%实 LAL-based detection assay 验室存在，中国实验室的比例更高) 凝胶法: 最简单、经济，应用最广泛，中国药典的“仲裁”方法，灵 敏度较差 支原体污染不易被发现，每毫升108个支原体才会导致 培养基浑浊，才能够被观察到 光度测定法: 更灵敏 (动态浊度检测限低于0.001EU/ml，动态显色 支原体不含细胞壁，在光学显微镜下不易观察 0.005EU/ml) 大多数实验室不对细胞培养系统进行支原体检测 浊度法 (终点浊度法和动态浊度法) 被支原体污染的培养系统会导致实验结果出现偏差 显色基质法 (终点显色法和动态显色法) 内毒素的预防 高压: 250 ，30分钟， 或者180 ，3小时 使用内毒素含量低的试剂和耗材 ·培养基 ·其他试剂 ·水 ·耗材 使用Corning® cellgro® 培养试剂，康宁细胞培养耗材 支原体污染对细胞的影响 支原体检测方法 影响细胞的生长状态及形态 大规模培养法 (cellgro产品使用的方法） ·利用营养丰富的培养基，直接对待检细胞、血清等进行支 原体培养 ·支原体分离和检测的经典方法，中国药典建议的方法 ·灵敏度高，耗时长 ·工业上常用方法之一 Large volume method of Kem and Barile as per Isolation of Myco-