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摘 要
选，阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培养，最后获得3株H9亚型HA特异性单克隆抗体(McAb)，
为IgG2a。该3株单抗对某些病毒有较高的中和活性。
对已有的H9亚型单克隆抗体进行累)91ELISA实验，筛选出针对不同抗原表位的单克隆抗体，
并进行纯化及HRP标记。经过配对试验，建立了以单克隆抗体Ai1／C6作为捕获抗体，酶标BDl2
为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法，用于检抄!IH9亚型禽流感病毒抗原。通过对各个反应条件进行
Na，CO，-NaHCO，缓冲液为包被液，3％脱脂乳．PBS稀释液为封闭液。
感病毒进行交叉反应性试验，结果表明：H9亚型禽流感病毒抗原捕捉ELISA方法与其他禽类病毒
及其他亚型禽流感病毒均没有明显的交叉反应性，说明该方法对H9亚型流感病毒具有高度的特异
检出量为7．6ng。重复性实验表明，同一样品的板内和板间的变异系数均小于lO％。
将包被好的反应板及酶标抗体和标准阴阳性抗原组装成简易试剂盒，同时保存于室温、4C平1
．20。C，定期进行检测，结果表明：试剂盒在室温保存时极不稳定，保存期限不应超过1个月，4C
‘
可保存4个月，可在-20C稳定保存5个月以上。‘
关键词 禽流感病毒：H9亚型；单抗；ELISA
Abstract
Inthis cellstainswere confusionSP2／0cells
experiment，three and
hybridoma developedbY spleen
ofimmunized
cells mousewithA1V
A／Chicken／Shandong／6／1
996(H9N2)．Threepositivehybridoma
eellstainsl F4C4、9Fl 1
2D1、2C5H2weredeterminedHlandELISA．whichHltitersofcell
by
andascites and
supernatantswere26、24、212‘2、2lo、27 McAbswere toH9
respectively．Thespecific
AIVandnotreactedwithH Hl O—H1 5 influenza
l-H8and avian virusesandotheraviandisease
subtype
viruses．TheofthethreeMcAbswere McAbshad
subtypes IgG2b,，lgG2a,IgG2brespectively．These
neutralizationtiters somestrainsofH9A1V
high against
Al 1／C6andBDI2wereusedas and McAbs for
coatingHRP-．1abelingrespectivelyantigen
capt
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