乳源杆菌菌株分类鉴定.pdf

摘要 乳杆菌(Lactobacillus)是工业上重要的乳酸菌．应用于许多动植物源性发酵食品的生产 中。由于它们的代谢特性和工艺学特性，需要在乳杆菌发酵食品生产过程中对它们进行安全 和质量控制。把乳杆菌鉴定到种和菌株水平的快速可靠的鉴定方法对于其基础理论研究和工 业需求具有重要意义。 本试验对9株发酵乳杆菌菌株(2株德氏乳杆菌保加利亚亚种、1株德氏乳杆菌德氏亚种、 3株嗜酸乳杆菌、1株发酵乳杆菌、1株干酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌)进行菌株水平上的多 相分类鉴定。通过MRS固体平板培养基反复划线和形态学观察进行菌株的分离纯化。包括 菌落观察、菌体常规磷钨酸负染色标本的透射电镜观察．并采用依据各个菌种水平上的生化 代谢差异设计的生化试验和基于差异代谢的关键酶编码基因序列的差异设计引物的特异性 PCR以及RAPD对这9株乳酸菌进行鉴定。依据菌落和菌体细胞的大小差异，划线分离得到 9株乳酸菌；通过透射电镜观察各菌体的丈小、形状以及裂殖方式；生化试验得到了6个发 酵型，将其鉴定为6个菌群．而特异性PCR扩增住菌株水平上将其鉴定为9株菌(2株德氏 乳杆菌保加利亚亚种、1株德氏乳杆菌德氏弧种、3株嗜酸乳杆菌、1抹发酵乳杆菌、1株干 酪乳杆菌、1株布氏乳杆菌)，与RAPD鉴定结果(20个随机引物的RAPD筛选也得到了9 个不同的基因型)一致。此外，本实验还获得了5个种特异性PCR引物：德氏乳杆菌保加利 1．2467的 杆菌的LbpmelAF．R、德氏乳杆菌德氏亚种的LbddlacZF．R．以及嗜酸乳杆菌菌株AS 株特异性的PCR引物LbamanNF—R．并推测AS1．1878甘露糖磷酸转移酶基因IID(manN) 与其他嗜酸乳杆菌株之间存在序列差异。 本实验进行￡∞fD6∞眈口delbrueekii、Lactobacilluscasei以及 acidophilus、Laetobacillus 的代谢酶编码基因的序列．设计菌种水平的特异性PCR引物，做出这些菌种不同菌株的PCR delbrueckii、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus 学研究和工业化生产提供理论和技术基础。并为其他乳酸菌的分类鉴定提供参考。 关键词：德氏乳杆菌：嗜酸乳杆菌：电镜；代谢酶基因：PCR Abstract arc Themmmbe墙ofllleLactobacillusare lacticacidbacteriathat important genus industrially involvedinthe of fermentedfoodsofboth andanimal of productionmany plant origin．Because their metabolicand needtocontrolthe and in peculiar technologicalproperties，we satly quality Lactobacillusfermentedfoods and of atthe reliableidentificationLactobacillus production．Rapid andstrainlevelsis interestforbasic andalsoforindustrial species ofgreat knowledge pur