体外法研究不同淀粉与滤纸纤维比例日粮对瘤胃发酵和微生物的影响.pdfVIP

动物营养学报 2007 ，19 （6 ）：654-662 （纸版发表英文文章页码） Chinese Journal of Animal Nutrition 利用PCR-SSCP 研究不同淀粉与滤纸纤维比例底物对瘤胃发酵和微生物的影响 王梦芝 王洪荣* 李国祥 张洁 曹恒春 （扬州大学动物科学与技术学院，扬州，225009 ） 摘 要：以三只瘘管山羊作为瘤胃液供体，用体外法研究不同底物对瘤胃发酵及瘤胃微生物的影响。底物设计为：可溶性淀粉/滤纸 纤维(NSC/SC) ：100:0，70:30，50:50，30:70，0:100 。结果表明：在 NSC/SC 的比例为 30:70 组微生物产量和纤维素降解率最高， 发酵状态最佳；原虫与细菌的比例，总体上有随 NSC/SC 下降先成上升后降低的趋势，在 NSC/SC 的比例为 50:50 组达到最高峰； 细菌 16srRNA 的 V3 可变区 PCR-SSCP 各组图谱反映了细菌类群内部种属因底物的改变而发生了应变。原虫显微观察结果表明随 NSC/SC 下降，内毛属与等毛虫原虫的比例下降，而双毛属与头毛亚科原虫的比例增加，即原虫类群内部种属也对底物变化的产生 应变。结果表明不同淀粉与纤维素比例水平底物不仅影响了瘤胃发酵也瘤胃微生物的群系特征。 关键词：可溶性淀粉/滤纸纤维、瘤胃发酵、瘤胃微生物、PCR-SSCP 近年来，分子生物学手段在瘤胃混合微生物居群特 系式饲养，青刈牧草为日粮，自由饮水，用于采集瘤胃 征研究上的应用扩大了瘤胃中可研究微生物的范围，而 液。 且直接将微生物的遗传物质作为研究对象其研究结果 也更为客观可信。其中 1989 年Orita[1] 首先使用的 1.2 试验原料与设计 PCR-SSCP遗传指纹技术，其原理是将PCR产物变性成 可溶性淀粉：[(C H O ) ,(162) ] ；滤纸：（浙江新 6 10 5 x x 为单链 （Single-strand DNA，ssDNA ），由于单链的三维 华）剪为 1mm 左右碎屑。可溶性淀粉/滤纸纤维比例为 [2] 结构受分子内互作效应影响（Lee et al. ，1996） ，序 （NSC/SC ）：A （100:0），B （70:30 ），C （50:50 ），D （30:70 ）， 列中的一个碱基的改变都将改变单链构象，不同构象的 E （0:100 ）。各2 重复。 短链ssDNA分子在非变性聚丙烯酰胺凝胶上的移动速 度不同，从而形成一个凝胶组带图案。利用之可将不同 1.3 产气与体外培养实验 序列的单链分离，该法经济简捷，因而被广泛用于基因 1.3.1 培养液配制 突变的检测，在群体微生物的居群特征分析上也有越来 [9] 参考Menke （1979） 配制培养液，及进行产气和体外 越广的应用（Junca et al. ，2004[3] ；Wenderoth et al. ， 培养实验。 2005[4] ；Cécile Callon，2006[5] ）。 1.3.2 产气实验 不同的日粮会引起瘤胃发酵状况的改变，且不同的 取 200mg 底物，20mL 培养液及 10mL 瘤胃液先后 日粮对瘤胃微生物的区系也有一定的选择作用，导致瘤 加入注射器，39℃水浴震荡培养；在2 ，4 ，6，8，10， 胃微生物区系比例的改变及日粮的降解性能的改变，进 12，14，16，18，20 ，24 ，36，48 ，72H 时读取产气量， 而改变移入宿主动物十二支肠的营养成分比例，最终影 并注意注射器气体量达 50ml 后放掉气体。一个无底物