海南水稻上一种新病害的病原鉴定及室内药剂毒力测定.pdfVIP

第 30卷 第 9期 热 带 作 物 学 报 V01．30 No．9 2009年 9月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL CROPS Sep．2009 海南水稻上一种新病害的病原鉴定 及室内药剂毒力测定 宋海超 ，史学群 ，肖 敏 ，吉训聪 ，王琼平 。 1海南大学环境与植物保护学院．海 口 570228； 2海南省农业科 学院农业环境与植物保护研究所 ，海 口 571100； 3海南新禾生物科技有限公司．海口 570311 摘要 近年来 。海南水稻生产上 出现一种类似稻瘟菌的病害 。该病害分布广、危害严重 ，已经成为当地水稻生 产 的一个潜在威胁 。本研究从海南不 同地区水稻上分离到该病 的病原菌，接种实验发现该分离物能引致与 田间 病害相 同的症状 。分生孢子形态鉴定和 ITS序列分析表 明，其为新月弯孢菌 (Curvularialunata)。杀菌剂室 内抑 菌实验结果表明。欧宝和凯润对其有较好 的抑制作用 。 关键词 水稻 ：弯孢 ：病原鉴定 中图分类号 S435．11 自2005年以来 ，在海南 ，不论是制种 田成株期 的水稻植株 ，还是早稻生产小苗的叶片和茎杆上 ，均 出现一种新病害 ，三亚 、乐东、琼海 、I临高、屯昌及海 口罗牛山水稻 田均有发现 ，发病面积约70hm2。 症状类似稻瘟病 ．叶片上 出现红褐色梭形或短条斑 ．茎杆上为红褐色大梭形斑或整段褐色 ，但不见病斑 两端的坏死线，给水稻生产造成较大损失。该病一般在4月初发生，5-6月为发病高峰期。由于国内至今 还未见该病有大型流行发生的报道 ，为了控制该病害的发生与为害．2007年和 2008年，笔者对引起海南 水稻新病害的病原及其特性进行 了研究。真菌的rDNA—ITS序列是鉴定病原真菌 的常用方法p-4]。本研究设 计了一对特异性引物 。对水稻病原弯孢进行 了鉴定。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 供试水稻品种 水稻 Ⅱ优 128、特优 128、博优 225购 自海南种子公司。 1．1-2 水稻病害样本 采集于三亚 、乐东、屯昌、琼海及海 口罗牛山等水稻种植区。 1．1．3 供试试剂 DNA片段回收试剂盒和pGM—T载体 、 酶和 dNTP购 自天根生化科技 (北京)有限 公司 ：rDNA—ITS通用引物 ITS4：5-TCCTCCGCTTATTGA TATGC一3和 ITS5：5一GGA AGTAAA AGTCGTAACAAGG一3．由北京奥科生物技术有限公司合成：大肠杆菌TOP10感受态细胞由本实验室 制备 ；其他试剂均为国产分析纯。 ， 1．2 方法 1．2．1 病害症状观察及 田间为害情况调查 分别在水稻病害发生严重的海南三亚水稻育种基地 、乐东黄 流镇的育种田，屯昌、琼海 、海 口近郊的水稻 田中采集病害样本 。小苗重点观察叶片病斑产生情况 ，成 株期水稻观察茎杆、叶片和稻粒病害发生情况 。田间为害情况主要调查病害在 田问的分布 、患病植株 的 产量损失 1-2．2 病原菌的分离、培养、致病性测定和形态观察 按照常规的方法对采集的水稻叶片和茎杆、谷粒 样本进行分离和培养 ：分别切取约 5mmx5mm的小块病组织 ，经过 70％乙醇和 0．1％升汞消毒 、灭菌水 作者简介：宋海超 ，女，1974年生，讲师，研究方向：微生物学。E-mail：songhaichao@sohu．co脚。 }通讯作者。吉训聪 。Tel：0898E-mail：jixuncong@21cn．con。 收稿 日期 ：2009—05—26 修 回日期 ：2009—08—17 1360 热 带 作 物 学 报 30卷 漂洗 3次后 ，将小块病组织转移至含 PDA培养基的平板上培养 ．观察菌落形态。 水稻栽培及病菌孢子悬浮液制备参照文献 5『1报道的方法。在水稻 Ⅱ优 128、特优 128、博优 225三个 品种上 ，分别采用直接喷雾接种和灭菌针扎小伤 口接种两种方式 ，在植株第 5叶即将完全展开时进行接种。 用 0