含pcHEV乃壳聚糖纳米粒的制备及对小鼠免疫作用的影响.pdfVIP

· 16· 浙江省医学科学院学报2009年 3月(总第 76期) 含pcHEV 壳聚糖纳米粒的制备及 对小鼠免疫作用的影响 王怡婷 沃恩康 摘要 目的将壳聚糖包载含戊型肝炎主要抗原表位基 因片段 的重组质粒 pcHEV ，制备成 CS-pcHEYm 纳米粒，并对其在小鼠体 内的免疫增强效果进行初步研究。方法 采用复凝聚法制备CS-pcHEV~纳米粒；检测 纳米粒的粒径、包封率及抵抗核酸酶能力 ；分析壳聚糖与pcHEV∞的聚合情况 ；免疫小 鼠，ELISA法检测血清中 HEVIsG抗体水平，流式细胞仪检测外周血CD4~．CD8~I淋巴细胞亚群百分比含量和CD4qCD8+。结果 制备 CS．pcHEV 纳米粒粒径在 170~470nm范围内；包封率95％；pcHEV 通过静电作用几乎完全被包裹在壳聚糖 内；纳米粒能抵抗 DNaseI酶降解有效保护 pcHEV 。免疫实验表 明CS-pcHEV=纳米粒可上词小 鼠血清HEV IgG抗体水平 ，并显著提高外周血 CD4q淋 巴细胞百分含量和CD4qCD8值 。结论 壳聚糖能高效装载外源基 因pcHEV~，保护其免受核酸酶的降解 ，有效提高小 鼠细胞免疫水平 ，具有 良好 的免疫增强作用 ，作为基因载体 具有较大的应用潜力 。 关键词 壳聚糖 基 因载体 细胞免疫 PreparationoftheChitosan—pcHEV23NanoparticlesandImmune ReponsesinMice WangYi—ting，WoEn-kang tituteofBioengineering，ZhejiangAcademyofMedicalSciences，Hnagzhou310013，China) Abstract0bjectiveTopreparechit0san—pcHEV nanoparticleswiththechitosan(CS)as genecarrierstocarrytheprimrayantigen epitopegenesofHEV andtostudyitsimmunological enhancementinmice． M ethodsTheCS-pcHEV wasprepraed with themethod ofcomplex coacervafion．Particlesizewasdeterminedby lasernanoparticlesizeanalyser．Theefficiencyof theencapsulationwasdeterminedbyultravioletspectrophotometer． Th ecombinationmannerof CSwith pcHEVm andhteabilitytoprotectpcHEV~from nucleasedegradationwereevaluated gelretardation assay． In immuneexperiment，selum HEV IgG contentswere determined by ELISA andperipheral bloodT lymphocytesubsetsCD4 andCD8 weredetected byflow cy- tometry． ResultsTh eparticlediametersofthenanoparticleswerefomr 170nm to470nm．Th e effieienciesofhte encapsulationwereallover95％． Th egelretradation assayshowedhtatCS could completely comb inewith pcHEV byelectrostatieffect． Th enucleasedegradation test 基金项 目：浙江省卫生厅医药卫生科学研究基金 (2007A001) 作者单位 ：杭州，3loo13，浙江省医学科学院生物工程研究所 浙江省医学科学院学报2009年 3月(总第 76期)