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半薄/超薄切片技术 董 凤 琴 2010-3 背景： 一、超薄切片技术介绍 超薄切片的基本要求: 固定地好 渗透包埋地好 切地好 载网膜做地好 染地好 超薄切片主要步骤 ★取材 ★固定 ★漂洗、脱水 ★渗透、包埋 ★超薄切片 ★超薄切片染色 1 取材 1.1 取材的基本要求 ? (1)动作迅速，取材后快速放入固定液中； (2)体积要小，一般1㎜3，如果来不及，例如野外取材，也可将组织修成（1×1×2）mm大小长条形，之后再进行分割。 (3)减小损伤，切割器械锋利，操作轻，避免牵拉、挫伤与挤压组织。 (4)低温操作，最好在低温(0℃～4℃)下进行，降低酶的活性。所用器具和固定液都应预冷。 (5)取材部位要准确。 1.2 取材方法 材料放在洁净的韧性较大的纸上 滴上预冷的固定液 用刀片将组织切下并修小 用牙签或镊子将组织块移至盛有预冷的固定液的小瓶中。 植物材料的取材可以先切成薄片，经适当固定后再切成小方块继续固定。 2 固定 (抽气) 2.1?固定的目的 ︾ 采用物理、化学等方法迅速杀死细胞的过程称之为固定。 ︾ 目的是尽可能使细胞中的各种细胞器以及大分子结构保持生活状态，牢固地固定在它们原来所在的位置上，不发生位移。 ︾ 良好的固定是获得精细结构的形态学图象的关键。 2.2 常用固定剂 (1)四氧化锇 (OsO4