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如何检测水样中的大肠杆菌 1、配稀释液（0.85%生理盐水——0.85g氯化钠+100ml水）和乳糖胆盐培养液（180ml）； 2、取4只试管，每只中加入9ml稀释液并盖上塞子； 3、另取4只试管，每只中放入一只小导管后加入10ml乳糖胆盐培养液，再盖上塞子； 4、配品红琼脂225ml（加热煮沸至全溶），入45度水浴中； 5、配乳糖发酵液180ml； 6、平皿用牛皮纸包成筒（15个）、试管用金属篓子装起、移液管用专业长筒装上同上 一起灭菌。 7、取出放入冰箱（只是品红琼脂立马倒15个平皿（15ml/个））； 8、将2步中的4只试管放在试管架上，用灭菌吸管在第一只管中加1ml样品摇匀；另用一只灭菌吸管从第一管中取1ml加入第二管中摇匀，该吸管用后插入第一管；又用一只灭菌吸管从第二管中取1ml加入第三管中摇匀，该吸管用后插入第二管；再用一只灭菌吸管从第三管中取1ml加入第四管中摇匀。若样品较脏，据情况可多做几个梯度。 9、初发酵：用1ml灭菌吸管吸各梯度的样1ml，分别接种在1管单料乳糖胆盐发酵管内，置44.5度培养箱中培养24h。 10、观察各管产酸（紫变黄）产气（小导管中）情况，从最右端产酸产气的一管开始往左取连续的四管进行分别涂板。 11、涂板，用接种环（在酒精灯上灭菌）取一环阳性液在平皿边缘开始涂板（约1/4面积）， 又从垂直方向（上边缘）涂板，只拉三条带菌线，涂成1.5/4面积，再从第二区边缘且垂直其划线方向涂板，只拉两条带菌线（目的是培养出单个的菌落）； 12、将涂好的放入37度培养24h后，取一片载玻片，用在酒精灯上灭菌后的接种环取2环生理盐水到玻片两端，再轻取典型菌落和非典型菌落各取一丁点儿在上片生理盐水中涂片（本应无色，若有紫色，是取到了琼脂），然后拿起玻片在火上方烤干，达到杀死菌并固定菌的作用。 13、染色：夏天染1分钟，冬天染2分钟。A 蓝色盖染液滴满玻片上固定的区域染色后开细水冲掉多的染液，用滤纸占去片上的水，B 黃色盖染液滴满片上固定区染色，细水冲，滤纸占，C 黑色盖滴满上区脱色，不计时，水冲占干，D 红色盖染液滴满上区10秒后水冲占干。注意：滤纸不能直接接触有菌区。 14、镜检，若是紫红色，则为革兰氏阴性。A、用40×物镜找到有菌区，B、在上区间滴2滴香柏油，在100×物镜下可清晰地看到杆菌。 15、用灭菌环取一些典型菌落接种到乳糖发酵管，置44.5度培养24h，如产酸产气，证实有大肠杆菌。 16、据乳糖发酵管的阳性（黄色）管数查表得粪大肠菌群菌值（含有一个粪大肠菌的克数或ml数）。 配制的培养基标签：培养基名称： 消毒日期： 有效期： 1∽2月 17、所用玻片、吸管、试管、三角瓶等用中光84消毒液泡30分钟后清洗，物镜用棉花占二甲苯清洗，再用擦镜纸拭。 编号 稀释度 结果(MPN/ml) 1 乳糖胆盐发酵管 1 0.1 0.01 0.001 + + - - 染色镜检 G G 乳糖发酵管 + + - - 2 乳糖胆盐发酵管 1 0.1 0.01 0.001 + + - - 染色镜检 G G 乳糖发酵管 + + - - 3 乳糖胆盐发酵管 1 0.1 0.01 0.001 + + - - 染色镜检 G G 乳糖发酵管 + + - - 4 乳糖胆盐发酵管 1 0.1 0.01 0.001 + + - - 染色镜检 G G 乳糖发酵管 + + - - 5 乳糖胆盐发酵管 1 0.1 0.01 0.001 + + - - 染色镜检 G G 乳糖发酵管 + + - - 一、试剂名称：××、生产厂家、批号、有效期 二、样品处理： 三、实验记录： 检测人： 年 月 日