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PDGFRβ与β2-syntrophin 蛋白相互作用的初步研究 迟锦玉，熊英，贺俊崎∗ 首都医科大学基础医学院生化与分子生物学系，北京 (100069) E-mail ：jq_he@. cn 摘 要：目的探索并鉴定PDGFRβ与PDZ蛋白β2-syntrophin新的结合作用以及该相互作用的 分子基础，为进一步研究PDGFRβ相关信号转导通路的调节提供线索。方法 制备 GST-PDGFRβ 羧基末端的融合蛋白，通过GST pull-down 技术，检测PDGFRβ-CT 与 β2-syntrophin的PDZ 结构域及完整的β2-syntrophin 蛋白的相互作用。结果 成功构建了重组 质粒pGEX-PDGFRβ-CT。在大肠杆菌中成功表达融合蛋白后，通过体外蛋白质结合实验证 实了PDGFRβ-CT 与β2-syntrophin 的PDZ结构域和兔脑组织中内源性的β2-syntrophin蛋白可 以相互作用。结论 PDGFRβ-CT 与β2-syntrophin 之间存在相互作用，该相互作用是由 PDGFRβ 的羧基末端与β2-syntrophin 的PDZ 结构域结合而实现的, 此结果为研究PDGFRβ 介导的下游信号转导通路以及细胞特定调控受体功能的机制奠定了基础。 关键词：PDGFRβ；β2-syntrophin；蛋白质相互作用 中图分类号：Q78 PDGFRβ（Platelet-Derived Growth Facter recepterβ）即β 型血小板源性生长因子受体, 是 一种跨膜糖蛋白，属于Ⅲ型酪氨酸蛋白激酶家族。它是由细胞外的免疫球蛋白样序列、跨膜 [1] [2] 区、近膜区和酪氨酸激酶区组成。研究表明PDGFRβ 与肿瘤密切相关。在食管癌 、肾癌 、 卵巢癌[3] 、脑胶质瘤[4] 及胃肠道间质瘤[5] 组织中，PDGFRβ 的表达水平均显著高于癌旁组 织及正常组织。然而，目前对PDGFRβ 复杂的生理、病理功能并未完全了解，尤其是PDGFRβ 激活后下游的信号转导途径更是不清楚。寻找细胞内PDGFRβ 的结合蛋白对于阐明PDGFRβ 的信号转导通路及其在细胞内的调控机制有十分重要的作用。 研究蛋白质的一级结构发现：不同种属PDGFRβ 羧基末端的最后四个氨基酸均为 D-S-F-L ，是典型的第一类PDZ蛋白结合模序(motif) [6] 。同时，有文献报道PDZ蛋白syntrophin 可以分别与电压- 门控钠通道SkM1、SkM2 以及钾内流通道Kv1.4 等多种蛋白发生相互作 用，其作用的方式均通过syntrophin 的PDZ 结构域与其结合蛋白羧基末端的短肽 （S/T-X-V） 的直接作用而实现的[7] 。据此我们推测，蛋白质PDGFRβ 也可能通过其羧基末端与syntrophin 发生相互作用。 为此本文首先构建PDGFRβ 羧基末端的融合蛋白表达载体(pGEX-PDGFRβ-CT) ，并对 该融合蛋白进行诱导表达与纯化，制备出结合琼脂糖珠的GST-PDGFRβ-CT 融合蛋白。同时 将重组质粒pET-β2-syntrophin-PDZ 转化到宿主菌E. coli BL21-DE3 中诱导表达，获得含 His-β2-syntrophin-PDZ 融合蛋白的细菌裂解液，采用GST pull-down 技术证实PDGFRβ-CT 可以与β2-syntrophin 的PDZ 结构域特异性结合，并用兔脑组织裂解液为研究对象进一步证实 PDGFRβ-CT 可与组织中完整的β2-syntrophin 蛋白相互作用。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 质粒和菌种 人PDGFR 全长cDNA，原核表达载体pGEX-2TK ，细菌株E.coli DH5α、Top-10 本课题得到国家自然科学基金（No. 3