电泳技术原理及应用（王超）.pdf

电泳技术原理及应用 电泳技术原理及应用 王超 wangchao@genomics.org.cn 王超 wangchao@genomics.org.cn 主要内容 主要内容 • 电泳技术的原理； • 华大实验平台涉及的电泳技术及其应用； • 琼脂糖凝胶电泳； • 聚丙烯酰胺凝胶电泳； • Small RNA的电泳分析（Gel Analysis of Small RNAs ） 电泳概述 电泳概述 电泳（Electrophoresis） 电泳（Electrophoresis） • 广义的讲，带电荷的物质在电场中的趋向运动称为 电泳；按是否有固体支持物将电泳分类为自由电泳 和区带电泳； • 带电粒子如蛋白、氨基酸、多肽、核酸等生物分子 都可以进行电泳，华大实验平台主要涉及的是核酸 的区带电泳； • 带负电的生物大分子（核酸），在电场作用下可以 向阳极泳动； • 用电泳的方法可以对不同理化性质的生物大分子进 行分离、鉴定和纯化 电泳技术的历史 电泳技术的历史 • 1809年俄国物理学家Pe нce首先发现了电泳现象； • 1937年瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳； • 之后，固体支持物被引入到电泳技术中，区带电泳得 到长足发展和广泛的应用； • 现在，各种丰富多彩的电泳形式层出不穷，用于分析 或分离各种有机分子 区带电泳 区带电泳 • 净电荷； • 分子大小； • 分子构型 影响电泳的因素 影响电泳的因素 μ=v/E=f （Q，r，η） μ=v/E=f （Q，r，η） • 带电质点在匀强电场中受力情况：动力F=QE ； 阻力F=6 πr ηv （Stoke定律）； • 当带电质点在电场中作稳定运动时，F= F或 QE=6 πr ηv ； • 因此单位电场强度下的移动速度（又称为迁移 率）μ=v/E=Q/6 πr η=f （Q，r ，η）； • 迁移率μ与带电质点的带电量Q、带电质点的大 小r 以及电泳介质η有关。而迁移速度v还与电 场强度E有关。考虑到带电分子的形状，迁移率 μ还与分子的高级结构有关 影响电泳的因素 影响电泳的因素 μ=v/E=f （Q，r，η） μ=v/E=f （Q，r，η） • 溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带 电性质及所带净电荷量； • 电场强度大，带电质点泳动速度快，因此电泳时 间短；但电场强度过大，会产生大量的焦耳热， 所以如有必要应配备冷却装置以维持恒温； • 离子强度I过低会降低缓冲液缓冲容量，不易维 持溶液的pH值，改变泳动速度；而过高的离子强 度会引起质点迁移率的降低； • 在电场作用下液体相对对于固体支持物的相对移 动称为电渗作用（electroosmosis ） 电渗 （electroosmosis） 电渗 毛细管电泳 毛细管电泳 毛细管电泳 毛细管电泳 • 经典电泳技术； • 微柱分离技术； • 适合生物大分子的分离； • 装置复杂； • 只能用于分析或微量制备 毛细管电泳 毛细管电泳 毛细管电泳（电泳芯片） 毛细管电泳（电泳芯片） • A