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RNA提取实验技术 蒋慧 11/27/2008 核酸是遗传信息的载体，是最重 要的生物信息分子，是分子生物学 研究的主要对象，因此核酸的提取 是分子生物学实验技术中最重要、 最基本的操作 。 内容简介 RNA的类型与功能 RNA的类型与功能 Total RNA的提取 Total RNA的提取 RT-PCR RT-PCR 一、 RNA的类型与功能 一、 RNA的类型与功能 核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一 类核酸，因含核糖而得名，简称RNA。 RNA普遍存在于动物、植物、微生物及某些病毒 和噬菌体内。在RNA病毒和噬菌体内，RNA是遗传 信息的载体。 RNA研究的三个阶段 第一个阶段在十九世纪的八十年代至二十世纪初， 解决了核酸的组成和核苷酸的结构。 第二个阶段在二十世纪五、六十年代．发现了 tRNA、 rRNA、mRNA， 破译了遗传密妈，基本搞清了RNA将 遗传信息从 DNA传递至蛋白质的途径。 二十世纪八十年代开始形成的第三次阶段，其研究 重点是重新认识RNA传递遗传信息的功能和全面认识 RNA生物功能的多样性。 过去百年中 RNA研究的主要成果 Kossel发现了四种碱基，因为他在核的生物化学 方面的贡献，获1910年诺贝尔生理与医学奖。他 是核酸和RNA研究的主要奠基人。 OChoa纯化了PNP酶并用它合成了高分子RNA,从而 获1959年诺贝尔生理与医学奖。 Holley测定了第一个核酸(酵母丙氨酸 tRNA)的一 级结构。 Khorana和 Nirenberg破译遗传密码而获1968年诺 贝尔生理与医学奖。 Sutherland发现作为第二信使的cAMP,从而获1971年 诺贝尔生理与医学奖。 Temin和Baltimore因发现以RNA为模板合成 DNA的反 转录酶，而获1978年诺贝尔生理与医学奖。 Altman和 Cech因发现RNA具生物催化活力，而获 1989年诺贝尔化学奖。 Robert和 SharP 因发现断裂基因(与RNA剪接有 关)，而获1993年诺贝尔生理与医学奖。 RNA的结构 RNA的结构 1965年R.W.霍利等测定了第 1个核酸－酵母 丙氨酸转移核糖核酸的一级结构即核苷酸 的排列顺序。 RNA一般是单链线形分子，也有双链的如呼 肠孤病毒RNA；环状单链的如类病毒RNA； 1983年还发现了有支链的RNA分子。 除一级结构外，RNA分子中还有（A对U；G对 C）二级结构，三级结构。 天然RNA的二级结构，一般并不像DNA那样都是双螺 旋结构，只有在许多区段可发生自身回折，使部分 A-U、G-C碱基配对，从而形成短的不规则的螺旋区。 不配对的碱基区膨出形成环，被排斥在双螺旋之外。 RNA中双螺旋结构的稳定因素，也主要是碱基的堆砌 力，其次才是氢键。每一段双螺旋区至少需要4～6 对碱基对才能保持稳定。在不同的RNA中，双螺旋区 所占比例不同。 三级结构研究得最清楚的是tRNA。 1974年，科学家用X射线衍射研究酵母苯丙 氨酸tRNA的晶体，确定它的立体结构呈倒L形。 RNA二级、三级结构 RNA二级、三级结构 RNA 的种类 RNA 的种类 RNA ncRNA mRNA Non-coding RNA. rRNA tRNA snRNA snoRNA Small RNA Others Ribos