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人永生化细胞研究新进展 程禄山 （西北大学陕西西安 710069 ） 摘要：肿瘤的发生是一个多基因、多阶段的复杂过程，其中致癌基因与抑癌基因 发挥了重要作用。目前对肿瘤的发生机制仍不十分清楚，无法在体内研究肿瘤发 生的全过程，为此需要借助于体外细胞模型来完成该类研究。永生化细胞是指体 外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有 无限增殖能力的过程。通过建立永生化细胞系，可以对人体的各类疾病进行更进 一步的研究，本文就永生化细胞系在肿瘤的治疗方面的最新研究成果做一综述。 关键词： 致癌基因 抑癌基因 永生化细胞 肿瘤治疗 明确正常细胞发生癌变的机制，将有助于为预防癌症、治疗癌症提供措施。 肿瘤的发生是一个多基因、多阶段的复杂过程，对于其中的机制仍不十分清楚。 由于无法在体内研究肿瘤发生的全过程，为此需要借助于体外细胞模型来完成该 类研究。目前，绝大多数研究只是基于啮齿动物细胞系水平，但要明确致癌物质 的确切作用，则需要人细胞模型。因此，建立永生化人细胞系就显得十分必要。 正常人细胞在体外培养过程中细胞寿命有限，无法满足实验需求。随着实验经验 的积累及细胞培养技术的提高，目前已经能够通过转染重组基因使细胞实现永生 化。 永生化细胞是指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰 老危机中逃离，从而具有无限增殖能力的过程。40 年前，Hayflick 等(1961)首次 发现在体外培养的人正常细胞，经一段时间的分裂，就会进入一种生长抑制状态， 即衰老期(M1 期) 。大多数真核生物细胞(生殖细胞、干细胞除外)都具有这种特性。 经转化了的细胞可越过衰老期而进入另一增殖抑制状态，即危机期(M2 期) ，危 机期的细胞开始出现退化，并逐渐死亡。只有少数细胞在一定因素的影响下，端 粒酶被激活，以自身RNA 为模板合成端粒DNA 来补充或延长端粒，恢复染色 体的稳定性，从而使细胞越过危机期，发生了永生化。 1.细胞永生化的分子机制 细胞永生化的分子机制是由于细胞内失去一个或更多与表达衰老机制相关 基因的活性，这些基因的表达可能直接导致细胞的衰老或其表达产物间接作用于 细胞衰老机制。 p53 基因是一种抑癌基因，它在细胞G1 期调控点中具有重要的调节作用，当 DNA 未完成修复时，p53 阻抑细胞于G1 期，直到DNA 完成修复，阻抑停止，细 胞进入S 期；如果DNA 损伤不能得到有效修复，则p53 可能诱导编程性死亡。 试验结果表明，p53 介导的细胞衰老可被IL-6 和bcl-2 所抑制。癌基因mdm2(murine double minute 2)与p53 之间存在负相关，当mdm2 基因产物水平升高时，会导致 p53 蛋白功能丧失；反之，p53 基因也能调节mdm2 基因的表达。 bcl-2 基因家族的发现开辟了新一类癌基因，其生物学效应是调控细胞存活 期，而不影响细胞增殖。bcl-2 能抗H2O2、t-丁基或甲萘醌对细胞衰老的诱导，颉 颃某些降低胞内还原型谷胱甘肽含量的制剂诱发的细胞衰老(Kane 等，1993)，能 阻断Ca2+流从内质网进入胞质而诱导的细胞衰老(Baffy 等，1993)等。可见bcl-2 能阻抑不同信号及细胞内途径造成的细胞衰老，可见bcl-2 在凋亡途径中的信号 [1] 汇集后的某个环节起着重要作用 。 2. 建立人永生化细胞的方法 2.1 病毒转染 2.1.1 EB 病毒 EB 病毒(epstein-barr virus)在体外能使B 淋巴母细胞永生化形成淋巴母细胞 样细胞系，它是通过潜伏蛋白激活细胞因子与其受体相互作用的途径使细胞永生 的。EBV 基因组含有100 多个基因，但只有几个基因在EBV 感染的B 淋巴细胞 中表达，称潜伏基因。EBV 感染静止期的B 细胞后，虽然提高了细胞p53 的转录 水平，但细胞并未衰老死亡，说明EBV 可能诱导其它细胞周期调控蛋白从而抑 制了p53 的促细胞衰老作用，使细胞永生。 目前,EB 病毒感染细胞使其永生应用最多的是B 淋巴细胞,可以直接用与EB 病毒共培养的方法,而在其他细胞中的应用很少。Fingeroth 等曾通过单