法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中心型脂肪酸结合.pdfVIP

人心型脂肪酸结合蛋白（h-FABP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中心型脂肪酸结合蛋白（h-FABP）含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 h-FABP 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物 素化的抗 h-FABP 抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB显色。TMB在过氧化物酶的 催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 h-FABP呈正相关。用酶 标仪在450nm波长下测定吸光度（ OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠 倒/搓动以助溶解，其浓度为150ng/ml，请先稀释至30ng/ml，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进 行倍比稀释）后，分别稀释成30ng/ml，15ng/ml，7.5ng/ml，3.75ng/ml，1.88ng/ml，0.94ng/ml，0.47ng/ml， 样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。如配制15 ng/ml标准品：取0.5ml （不要 少于0.5ml ） 30ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度 以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100 稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所 需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸 标本的采集及保存 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本 放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本 放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 其它生物标本：请1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免 反复冻融。 注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2 个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试 剂或样品稀释时，均需混匀，混 匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品 符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100μl，余孔分别加标准品或待测样 品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上 盖或覆膜，37℃反应120 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加 上覆膜,37℃反应60 分钟。 3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻 拍将孔内液体拍干）。 4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将 孔内液体拍干）。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔 有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，