大豆异黄酮联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响.pdfVIP

延边夫学医学部内科学专业研究生毕业论文 日!J 吾 顺铂是高效，广谱的抗癌药物，广泛用于治疗肺癌、卵巢癌、睾丸癌、乳腺癌、 宫颈癌、膀胱癌、鼻咽癌、恶性淋巴瘤及头颈部肿瘤…，顺铂对肺腺癌细胞A549有 显著的杀伤作用，但长期应用后的耐药性及毒副作用问题日益严重。肿瘤细胞对化 疗药物产生原发或继发性多药耐药，最终导致化疗失败，肿瘤细胞转移和复发，仍 是肿瘤患者死亡的主要原因之一。最新资料表明【2】在肿瘤年死亡率中，属内源性多 药耐药的肿瘤所致者约占61％，属获得性多药耐药的肿瘤所致者约占33％，Bfl90％ 以上的肿瘤患者死因不同程度地与耐药有关。顺铂的毒副作用有骨髓抑制、肾损害、 听神经受损、胃肠道不适等，给患者带来极大的痛苦甚至于危及生命。改善长期应 用化疗药物产生的耐药性，减少化疗过程中的毒副作用已成为现代科学研究的重点。 1900年美国癌症研究所确认大豆中有5种成份具有抗癌活·眭。这5种成份分别 是：植物甾醇、醇六磷酸、大豆皂甙、胰蛋白酶抑制素和大豆异黄酮。近几年科学 家们的研究兴趣集中在大豆异黄酮。研究表明131，大豆异黄酮除防癌抗癌外，能降 低血脂、抗动脉粥样硬化、改善妇女更年期综合征、防止鼻出血、抗炎、改善骨质 疏松等。自然界中异黄酮资源十分有限，大豆是唯一含有异黄酮且含量在营养学上 有意义的食物资源，这一点赋予大豆及大豆食品特别的重要性。大豆异黄酮是大豆 生长中形成的一类次生代谢产物，它主要分布于大豆种子的予叶和胚轴中，其中子 叶占大豆异黄酮总量的80～90％，而胚轴仅占lO～20％。大豆异黄酮的基本骨架为3 一苯基苯并二氢呋喃，主要有黄豆苷元glycitein(7．4一二羟基异黄酮)、染料木素 6一甲氧基异黄酮)。天然存在的大豆异黄酮较多，共有12种，它们大多以异黄酮葡 萄糖苷和丙二酰基异黄酮葡萄糖苷形式存在，共占异黄酮总量的95％～98％；而游 离型异黄酮(苷元)的含量很低，以苷的形式存在，不易被生物体吸收。在未加工 的植物体中，异黄酮主要以糖苷形式存在。被人和动物摄入体内后，以糖苷形式存 延边大学医学{i|；内科学专业研究生毕业论文 在的大豆异黄酮在肠道细菌，微生物的p．葡萄糖苷酶或p半乳糖苷酶的作用下转化 为具有生物活性的苷元，即转变成游离形式才被吸收。其中起生理药理作用的主要 是染料木紊和大豆黄素【4l。本研究将大豆异黄酮用于体外培养的人肺腺癌A549细胞， 探讨其能否抑制人肺腺癌A549细胞生长及诱导细胞凋亡，并将大豆异黄酮与顺铂联 合应用于肺腺癌A549细胞，研究二者联合应用对肺腺癌A549细胞的影响。探讨肺腺 癌化学治疗的新方案，为临床应用提供理论依据。 延边大学医学{；lI内科学专业研究生毕业论文 材料与方法 1．1．1材料 肺腺癌A549细胞株： 中国科学院上海细胞研究所提供 RPMI—1640干粉： 美国Gibco公司生产华美生物工程公司提供 小牛血清： 华美生物工程公司提供 二甲基哑砜(DMSO)：上海化学试剂一厂‘提供 噻唑蓝(MTT)： 美国SIGMA公司生产华美生物工程公司提供 细胞凋亡原位检测试剂盒：北京中杉金桥生物技术有限公司提供 96孔细胞培养板： 华美生物工程公司提供 胰蛋白酶： 美国Gtbco公司生产华美生物工程公司提供 大豆异黄酮： 石家庄工大生物制品有限公司提供(含量85％ 大豆黄素45．99％，染料木素12．43％批 顺铂： 江苏豪森药业股份有限公司提供批号 (050602)规格(10mg／m1) DAB： 北京中杉金桥生物技术有限公司提供 1．1．2受试物处理 用于细胞时DMSO的浓度O．1％。 1．2仪器 超净工作台： 上海浦东荣丰科学仪器有限公司生产SZX一100372型 11每1型二氧化碳培养箱：日本三羊电子有