石鲽外周血细胞的培养及染色体制备条件的探讨.pdfVIP

青岛农业大学学报 (自然科学版) 26(4)：325～329，2009 JournalofQingdaoAgriculturalUniversity(NaturalScience) 文章编号：1674—148X(2009)04—0325—05 石鲽外周血细胞的培养及染色体制备条件的探讨 林明敏 ，朱香萍 ，李美玉 ，衣瑞玲 (1．青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛266109；2．山东绿叶制药有限公司) 摘要：以石鲽 (Kareiusbicoloratus)为试验材料研究探讨其外周血细胞培养及染色体制备的条件方法。用RPMI 1640全血培养基进行培养，从血液保存时间、刺激源 PHA(植物血球凝集素)和ConA(刀豆蛋白A)等方面对外周 血淋巴细胞的培养及其染色体制备条件进行探讨，建立较成熟的石鲽外周血淋巴细胞培养及染色体制备的方法。 结果表明：血液于4~C保存 3d后用全血培养基进行培养 ，细胞仍可正常生长 ；在 16~(2培养温度下，ConA和PHA 两种刺激源均能促进石鲽外周血淋巴细胞的分裂增殖 ，培：养时间以72h最好 ；从培养的血细胞形态和白细胞数 目 来看，以ConA为刺激源的作用效果好于以PHA为刺激源的作用效果；5ml培养基中加入 0．2ml全血 ，16％下用终 浓度为0．1mr,／ml的ConA为刺激源培养72h，在结束培养前4h加入终浓度0．60．g／ml秋水仙素，0．075mol／L的氯 化钾低渗 35min可获得较好的染色体分裂相。 关键词：石鲽；外周血细胞培养；染色体制片 中图分类号：s968．1 文献标识码：A StudyonPeripheralBloodCellCultivationandChromosomePreparation inStoneflounder(Kareiusbic0loratus) LIN Ming—min ，ZHU Xiang—ping ，LIMei—yu ，YiRui—ling (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，QAU，Qingdao266109．China；2．Luye～pharmCo．LtdofShandongProvince) Abstract：Stoneflounder(Kareiusbicoloratus)wasusedtoexploretheconditionoftheperipheralbloodcellcuhi— vationandchromosomepreparation．TheperipheralbloodcellwasculturedwithRPMI1640wholeculturemedium． Theconditionsoftheperipheralbloodcellcultivationandchromosomepreparationweresearchedfrom preservation timeofblood，stimulation (PHAandConA)，andSOon．Theresultshowedthatthecellsofwholebloodwhich preservedfor3daysunder4℃ couldgrow nomally．Unde-r16oC．bothConA andPHA couldfacilitateKareiusbi． coloratus’peripheralbloodcellproliferating，andthebestculturingtimewas72h ．TheeffectofConAwasbetter thanthatofPHA from theshapeofhematocyteandthenumberofleukocyte．Betterchromosomesamplescouldbe obtainedunderfollowconditions：adding0．2mlwholebloodandConA (finalconcentration0．1mg／m1)in5ml wholebloodmedium，cultivatingfor72hoursunder16℃，addingcolchicines(finalconcentration0．