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菌 物 学 报 25 （1）：48~55, 2006
Mycosystema
粉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的 cDNA 克隆及其序列和
蛋白质分析
黄 勃 汪章勋 樊美珍 李增智*
（安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥 230036 ）
摘 要：粉拟青霉是一种常见的昆虫病原真菌，被广泛用于生物防治。根据GenBank 中已登录的淡紫拟青
霉， 球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的类枯草杆菌蛋白酶基因序列的同源性比较，以它们高度保守的核苷酸
序列设计一对引物，采用 RT-PCR 和 3’/5’-RACE 相结合的方法，首次从粉拟青霉中克隆出完整的类枯草
杆菌蛋白酶cDNA 基因。其全序列为2060bp ，该序列5’-端和3’-端的非编码序列长度分别为209bp 和252bp，
开放阅读框为 1599bp，编码 532 个氨基酸，信号肽长度为 16 个氨基酸。成熟蛋白的氨基酸序列和金龟子
绿僵菌小孢变种（CAB63913 ），玉米赤霉菌（EAA68914 ），金龟子绿僵菌蚱蜢变种（CAC95047 ）及柄孢
壳（ ）的同源性分别为 、 、 和 。成熟蛋白具有典型的丝氨酸蛋白酶活性位点，
AAC03564 69% 71% 68% 68%
同时有 5 个半胱氨酸，3 个潜在的 N-糖基化位点和 2 个可能的 O-糖基化位点。该基因在的密码子第三位
碱基的使用上，显示出明显的对 C 的偏爱。
关键词：虫生真菌，粉拟青霉，类枯草杆菌蛋白酶基因，cDNA
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
Q939.96 A 1672-6472 2006 01-0048-0055
Cloning of sublitisin-like protease gene cDNA from Paecilomyces
farinosus and characterization of its sequence and deduced protein
*
HUANG Bo WANG Zhang-Xun FAN Mei-Zhen LI Zeng-Zhi
(Anhui Provincial Key Laboratory for Microbial control, Anhui Agricultural Univerisity, Hefei 230036)
Abstract: Paecilomyces farinosus is one of the most common species of entomopathogenic fungi ，and has been
used as biocontrol agents against pests. In order to clone a complete cDNA of sublitisin-like protease from P.
farinosus , a pair of primers was designed according to the high conserved nucleotide sequences in GenBank, and
RT-PCR, 3’/5’-RACE PCR were used. Analysis of the cloned complete cDNA, with a whole sequence of 2060bp,
showed that it encompassed a open reading frame (ORF) with 1599bp encoding 532 amino acid (aa) residues,
including 18-aa signal peptide, 135-aa propeptide and 341-aa mature polypeptide. Alignments with the deduced
amino acid of mature proteins in 4 species of fungi showed 69%, 71%, 68%, and 68%, respective
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