酵母系统表达风疹病毒E1糖蛋白在ELISA诊断中应用研究.pdfVIP

酵母系统表达的风疹病毒E1 糖蛋白在ELISA 诊断中 的应用研究1 王志玉，温红玲，王桂亭，许洪芝，宋艳艳，姚苹，陶泽新，宋绍霞 (山东大学公共卫生学院, 济南 250012) E －mail: zhiyu.wang@ 摘要: 本研究将毕赤酵母表达系统中表达的E1 糖蛋白作为包被抗原，建立一种优于病毒作 为包被抗原的RV 抗体ELISA 检测方法。将重组E1 抗原和风疹病毒（rubella virus，）RV） 分别作为包被抗原，用间接ELISA 法检测90 份临床血清标本，同时用晶美（JINGMEI）进口 分装试剂盒和德国RECI 公司试剂盒进行检测；将RECI 试剂盒作为金标准，计算另外三者检 测结果的特异性、灵敏性和符合率；比较它们之间的差异有无统计学意义，特别是重组抗原 与病毒抗原作为包被抗原检出RV 抗体阳性率的差异有无统计学意义。与德国试剂盒相比， 该重组抗原敏感度为67.11%，特异度为71.43%，两者的符合率为67.78%；病毒抗原分别为 50%、78.57%、54.44%；晶美试剂盒分别为84.71%、71.43%、82.22%。重组蛋白重复性实验 结果经统计学处理P 值0.05，差异无统计学意义；RECI 试剂盒与重组抗原、病毒抗原的检 测结果的差异有统计学意义（P＜0.05）；RECI 试剂盒与晶美试剂盒的检测结果的差异无统 计学意义（P＞0.05）；晶美试剂盒与重组抗原的检测结果的差异有统计学意义（P＜0.05）； 重组抗原与病毒抗原的检测结果的差异有统计学意义（P＜0.05），作为包被抗原，重组抗 原优于病毒抗原。结果表明用毕赤酵母表达的RV E1 重组蛋白作为包被抗原进行ELISA 检测 优于病毒作为包被抗原，具有广阔的应用前景。 关键词: 风疹病毒 酵母表达 糖蛋白类 ELISA 1． 引言 风疹病毒（rubella virus, RV）属单股正链RNA 病毒。病毒颗粒包含三种结构蛋白， 衣壳蛋白C 和两种包膜糖蛋白（E1 和E2），分子量分别为33、58 和42kD。E1 的免疫原性 最强，是主要的靶抗原，在特异性免疫应答中起主要作用。E1 的11～39、154～179、199～ 239、226～277、389～412 位氨基酸残基主要与细胞免疫应答有关，而213～239 和258～277 位氨基酸残基主要与体液免疫应答有关［1］。 RV 感染的危害不在于风疹本身，而是先天性感染和风疹后脑炎。妊娠期妇女感染RV 越 早，其危害程度越严重［2］。因此，RV 抗体的检测对开展风疹疫苗预防、临床实验室诊断等 都具有重要意义。目前RV 感染的诊断主要以血清学诊断为主，我国生产的用于检测RV 抗体 的试剂盒仍为细胞培养抗原，其不足之处在于抗原纯化时难以完全排除其中的细胞蛋白成 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（20030422018 ）、山东省科技厅重点发展规划项目 （2001BB1CAA7 ）资助 1 分，抗原成分不均一，性质不够稳定，敏感性及特异性较差，而国外进口的试剂盒虽然质量 较高，但价格普遍昂贵，不适合基层实验室的使用。因此，构建RV 抗原的表达克隆，制备 重组RV 抗原，进而研制我国自己的新型RV 重组抗原诊断试剂盒具有重要意义。 本研究将RV E1 蛋白在毕赤酵母表达系统中进行表达，将所表达的重组抗原作为包被抗原， 初步建立了一种检测RV 感染的间接ELISA 法。 2． 材料和方法 2.1. 细胞和病毒 BHK21 细胞在Eagle 中35℃培养，CO 含量为5％。RV JR23 株为本室保存。当细胞形 2 成单层时感染病毒，当能观察到明显的病变时收集病毒。 2.2 重组抗原 E1 基因通过EcoR Ⅰ和 Xba Ⅰ连接到pGAPZ αA，在酵母表达系统中表达重组E1 蛋白。 2.3 血清 人类血清为本室采集、制备。 2.4 其它试剂 96 孔酶标板为美国Nunc 产品，ELISA 试剂盒分别为晶美分装试剂盒（批号：EL100317） 和德国RECI 公司试剂盒（批号：0519201