γ干扰素联合甲强龙对人胚肺成纤维细胞的影响.pdfVIP

中文摘要 Y干扰素联合甲强龙对人胚肺成纤维细胞的影响 摘 要 (human embryoniclung factor—beta 转化生长因子pl(transforminggrowth one， TGF．p 与M—pred联合应用的体外实验探讨两药联合应用对肺间质 性疾病的治疗效果，为临床治疗提供理论依据。 方法：将HELF于37℃，5％C02，饱和湿度条件下， 含10％新生牛血清，青霉素100U／ml，链霉素100 gg／ml的 RPMI 1640培养液中传代培养，待细胞进入对数生长期后进 行实验操作。采用2×4析因设计法进行实验设计，按 1 M—pred(Oi 5pg／m1)幂ll 0U／ml，即对照组；B 8个组，A组：M—pred099／ml+IFN．Y 组：M—pred 1 1 分别为：M—pred599／ml+IFN一1，250U／ml，M—pz’ed5I，tg／ml +IFN—Y 15 750U／ml。药物作 500U／ml，M—predgg／ml+IFN．Y 用-：j二HELF48h后，进行以下实验： 处理，二甲基亚枫终止反应。分别测定各组570nm波长处吸 中文摘要 光值(A值)，计算细胞抑制率。 cellnuclear antigen，PCNA)表达情况：细胞爬片，加入药物 作用48h后，经过固定，抗原修复，封闭内源性过氧化物酶， 及非特异性抗原结合位点后，加入一抗，小鼠抗人增殖细胞 核抗原单克隆抗体(用PBS代替一抗作为阴性对照)；二抗， 生物素化的山羊抗鼠lgG抗体，二氨基联苯胺 中性树胶封片。在光镜下每组随机观察lO个视野，计数细 胞总数，并计数阳性细胞数，分别计算各组细胞表达阳性比 率。图象分析系统处理，计算各组阳性细胞平均光密度值。 3用碱水解法测定培养液中羟脯氨酸含量代表HELF胶 原合成变化：分别收取各组培养液0．5ml，按羟脯氨酸试剂 盒操作说明处理后，测定各组550nm波长处吸光值，计算羟 脯氨酸含量。 reverse 4半定量逆转录一聚合酶链反应(semi—quantify chain transcriptionpolymerase TGF一131 用随机引物、AMV逆转录酶合成cDNA，扩增产物在1．5％ 琼脂糖凝胶上进行电泳，EB染色，应用读胶仪读取各扩增 物的积分光密度值的比值计算相对表达水平。 X 样本收集细胞l 108个，PBS洗涤后，裂解，提取细胞胞浆 蛋白。考马斯亮兰测定蛋白浓度。每梳：}UJH 10099样品蛋白。 经凝胶电泳后转至PVDF膜上。封闭1h，加入第一抗体，4。C 中文摘要 过夜。加入第二二抗体，孵育111，利州化学发光法进’1％州J-I址f色反 心，数0叫纠像分析系统照J4Iji：琰墩符条带们积分光密度位 (IOD)。 以上结果应用SPSS12．0统计软件分析，对数据进行析因 设计的方差分析，取p0．05为有统计学意义。 fI勺作用在一定剂量范围内成剂量依赖性，其中500tgml为最 析因分析结果表明，IFN_Y与M．pre联合应用具有交互作用 (pO．05)，即两药联合应用抑制HELF增殖的作用增强。 免疫细胞