bkt和crtR-B基因植物表达载体的构建及其在花生和玉米中的遗传转化.pdfVIP

摘要 虾青素是一种抗氧化活性极强的类胡萝h素，具有广泛的应用价值。B一胡萝h素酮化酶(BKT) 和B．胡萝h素羟化酶(C舡R．B)是虾青素生物合成途径中的两个关键酶。花生是世界上主要的油料 作物和经济作物，其体内不合成虾青素。但存在虾青紊合成的前体物质B．胡萝h素。故本研究采用基 因工程技术手段，将这两个基因导入花生，为实现利用转基因花生生产大量虾青素提供实验和理论 和c隙坷基因，将这两个基因构建入载体pGulBlAl301。形成带有抗性基因的双价植物表达载体 胚小叶及胚生长点作为侵染外植体，经工程菌Ⅲ执105倒：舢衄IAl301击胁c，tR侵染后再生芽，通过 Km筛选获得46株抗性植株，PCR检测初步证实她。和c棚Ⅻ基因已经转化到花生基因组中。 玉米是重要的粮食作物和饲料作物，其中含有大量的玉米黄素，却未见虾青素的生成。B一胡萝 h素酮化酶(BKT)可以将玉米黄素催化形成虾青素，因此通过植物基因工程方法将该酶基因转入 玉米中，从而提高虾青素含量，改善玉米品质具有重要意义。利用三口妇口DNA聚合酶以PCR的方 35S 启动子和N0s终止子的6打基因表达盒．然后插入植物表达载体p(啪队1301的多克隆位点．最 终获得带有目的基因、选择标记和G№报告基因的植物表达载体pC啪n1301批。以冻融法将该 载体转入农杆菌I 养1d的胚性愈伤组织为转化受体，经工程菌侵染后通过Hyg筛选获得抗性愈伤。经Gus组织化学 染色分析表明Gus报告基因已经转入玉米胚性愈伤组织，进一步采用PCR扩增的方法对目的基因进 行验证，结果表明抗性愈伤的基因组中含有6缸基因。 资料检索结果表明，到目前为止尚未有将b时和cr承基因导入花生和玉米的报道。 关键词：花生，玉米，B一胡萝}素酮化酶基因，B一胡萝h素羟化酶基因，载体构建，农杆菌，遗 传转化，虾青素 Abstract Astax锄thin valuc．BKTandcKIR·B witIlbj911antio，ddaIltactivityisofgmatapplication are憎okey isone 0f勰taxantllinwhichencoded ofthe bios”mesisenzymes by五幻geneaIld矾融口gene．Pe∞ut thereisnoastax柚thinbut删c118—camtenein were o订衄deconomic it．So，two important cmps哪d genes tf蚰sfcrredto inthe of someindexesfortIle pe柚ut gene-eⅡgineerillg hopc umizing technique proViding of asfax卸th纽 P1ant Ⅵc眦 produc￡ionlaIge-scale usingt删1sg锄耙peanut． e坤fession obtained po镰仍IAl301—沈一cr暖withbinafygc肿w鹤∞ns咖ctcdbyin∞ftiⅡg触fge∞柚dcr吠坷gcne PCRm山od硒mVector by pET猫a(+№打∞dpET．28a(+扣艘in