六味地黄丸预防激素性股骨头坏死分子机制与研究.pdfVIP

河南大学2010届硕士掌位论文 六味地黄丸预防激素性股骨头坏死的分子机制研究 中文摘要 ofthe femoral 目的激素性股骨头坏死(osteonecrosis 常见病和疑难病。目前激素性ONFH的临床治疗进展缓慢，往往出现坏死才进行 治疗，严重影响了患者的工作和生活质量，由于其发病机制尚不清楚，现仍没有 有效的预防措施，最终大多需行人工全髋关节置换。因此，干预、阻断使用激素 导致的ONFH进展，对其发病机制和防治技术进行研究，具有重要的意义。本实 验中，建立激素性股骨头坏死动物模型，应用六味地黄丸干预，探讨六味地黄丸 实验依据。 方法取成年健康昆明小鼠36只，体重40--50 g，平均469，随机分为3组 B、 照组(A组)，马血清+激素组(B组)，马血清+激素+六味地黄丸组(C组)； C组小鼠按10 mL／kg腹腔注射马血清，间隔2周后按5mL／kg再次腹腔注射马血 清，第二次注射马血清同时肌肉注射醋酸泼尼松龙45 d，制备激 mL／(kg·d)，共5 素性ONFH小鼠模型，于应用激素同时B组灌服生理盐水10 mL／(kg·d)，C组灌 服六味地黄丸2g／(kg·d)至处死；A组小鼠不制备模型，同时间点肌肉注射及灌服 等量生理盐水。处理后观察小鼠一般情况，于第1次激素注射后2、4、8周处死 小鼠，大体观察股骨头，取双侧股骨头及肝脏行组织学及免疫组织化学染色观察， 据以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK检验，尸值 0．05为有统计学意义。 结果 一般情况及大体观察：第一次腹腔注射马血清后所有小鼠均无明显变 化；第二次腹腔注射马血清后约6小时，B、C组小鼠出现食量减少、萎靡、反 l 六味地黄丸预防激素性股骨头坏死的分子机制研究 应迟钝、活动少等现象，C组小鼠约1周后逐步好转，B组小鼠约2周后逐步好 一只，C组小鼠于第二次腹腔注射马血清后lOmin死亡一只，余小鼠均存活至实 验完成。3组动物各时间点股骨头外观形态均正常，关节软骨面均光滑、平整， 色泽无异常。 HE染色观察：A组各时间点肝脏均正常；股骨头骨小梁粗大、完整，排列规 则，骨细胞清晰可见，偶见空骨陷窝，髓间脂肪细胞相对较少，形态正常，造血 细胞丰富。B组第1次激素注射后2周时肝细胞肿胀，细胞内可见小脂肪空泡， 肝索结构不清，肝窦变窄；第1次激素注射后2周时见骨小梁较正常变细，部分 断裂，骨细胞空骨陷窝增多，部分骨细胞边聚、固缩，髓间脂肪细胞直径增大， 数目增多；4、8周时骨小梁变细、稀疏，断裂处增加，可见骨碎片出现，空骨陷 窝率增高。C组肝脏及股骨头各时间点较A组变化不显著。B组空骨陷窝率明显 高于A、C组(P0．01)，A、C组间差异无统计学意义(胗0．05)。 颗粒多见、骨保护素配体(osteoprotegerin 色率无明显改变；B组第1次激素注射后2周，OPG阳性表达棕黄色颗粒偶见， OPGL阳性表达棕黄色颗粒较多，第4、8周时，阳性率降低和升高有增加趋势； 第8周差异无统计学意义(尸0．05)。 细胞凋亡分析显示：B组各时间点均可见细胞核中出现较多棕黄色颗粒的阳 性细胞，其凋亡指数(apoptosis II 河南大学2010届硕士掌位论文 阳性细胞偶见，细胞m无明显改变。B组较A、C组骨细胞凋亡指数显著升高， 差异有统计学意义(PO．01)。 结论：