芦笋提取物对慢性铅中毒小鼠解毒的影响成型稿.docVIP

基础医学综合实验 实验设计 系 队 学号 、 、 姓名 、 、 芦笋提取物对慢性铅中毒小鼠解毒的影响 口腔医学系15队 韩士超，呼啸，刘彬，田立宝 实验目的和意义 铅离子对人体尤其是婴幼儿中枢神经系统和周围神经系统有明显的损害作用，其理想的血浓度为0，但环境中铅离子普遍存在，当体内的铅离子超过一定水平时就会对人体健康产生危害。铅及其化合物进入机体后对神经、造血、消化、肾脏、心血管和内分泌的多个系统产生危害[1]。目前常见的铅中毒大多属于轻度慢性铅中毒，主要病变是铅对体内金属离子和酶系统产生影响，引起植物神经功能紊乱、贫血、免疫力低下等。 芦笋 (asparagusof ficinalis)又称石刁柏、龙须菜，属百合科天门冬属多年生宿根草本植物，雌雄异株。芦笋嫩茎味美鲜嫩，营养丰富，具有极高的营养保健价值，在国际上享有“蔬菜之王”的美称。 芦笋主要含有维生素、蛋白质、矿物质并富含多种活性成分，芦笋富含十八种氨基酸及谷胱甘肽和锌、铜、钙等元素，芦笋具有抗肿瘤、抗衰老、降血压、解毒等功能。[2]但是对于它对铅中毒的解毒作用目前尚无报道。 谷胱甘肽是谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸构成的三肽化合物，能够与体内的铅结合形成水溶性化合物经肾脏排出体外[3]。早在上世纪七十年代国外就提出了用谷胱甘肽作为解毒剂治疗某些中毒患者，且国内也有用谷胱甘肽治疗铅中毒的报道。 钙离子和铅离子在人体的代谢过程中具有竞争作用，钙的补给能抑制和减少铅的吸收[4]。 芦笋作为生活常见蔬菜，研究其对铅中毒的解毒作用具有很大的实际意义。因而本实验的结果对于人们通过日常饮食和临床用药防治铅中毒具有指导意义。 材料和方法 1．实验动物及饲养条件[5] 清洁级昆明种健康小鼠60只，雌雄不限，体重20±2g；动物饲养在本中心SPF级屏障设施内，室温保持在20—25℃ ，相对湿度40％一70％，通风换气，每周换窝1～2次。 2．样品、仪器与试剂 清洁级昆明种健康小鼠60只，雌雄不限，体重20±2g；基础饲料（40天用）；蒸馏水；三水醋酸铅；芦笋茎叶粉；水浸法提取全套装置；代谢笼；手术器械若干；SMP-2型溶出分析仪（C型）；。。。。。。。。。。。。。。。。。。 其中，昆明小鼠、基础饲料来自实验动物中心，三水醋酸铅购自学校试剂中心，绿芦笋购自蔬菜市场。 3．实验方法 我们先建立慢性铅中毒小鼠模型，喂食芦荟提取物一段时间后，用SMP-2型溶出分析（C型）测定小鼠血铅(PbB)、尿铅(PbU)、记忆障碍指标，来证明芦笋提取物对慢性铅中毒小鼠解毒的作用。 3.1 实验分组及步骤[6] ①小鼠60只，适应性喂养3天后，随机分为两组。对照组10只，模型组50只。 ②建立慢性铅中毒小鼠模型后，从中随机抽取10只小鼠作为模型A组。A组和对照组于代谢笼中收集各组小鼠24h尿液备检。小鼠采用Morris水迷宫法测定平台象限的游泳时间和其穿越平台的次数以测定其记忆障碍指标，然后脊椎离断法处死小鼠心脏采血，立即称取1ml血于清洁试管内，加入抗凝剂后备检。 ③将余下的模型小鼠中随机分为两组即B组和C组，每组20只。B组为病理对照组（即不予任何治疗），仅喂食基础饲料；C组为芦笋提取液解毒组，在喂食基础饲料的基础上，每天按0.3ml/10kg体重用芦笋提取物对小鼠进行灌胃。 ④在治疗的第10天分别从模型B组和C组各随机取10只小鼠，按前述方法采集样本备检。 ⑤治疗20天时，将剩余动物按前述方法采集样本备检。 3.2芦笋提取物的制备[7] 芦笋提取物的制备 新鲜芦笋茎叶洗净晾干，按1：2的比例加入蒸馏水，捣碎，用NaHCO3调至pH 7．2，水解过液离心，取上清液即为实验所需提取物。 3.3慢性铅中毒小鼠模型的建立[8] 昆明小鼠在喂食基础饲料的基础上饮用2.0g／L三水醋酸铅水溶液15天染毒建立慢性铅中毒小鼠模型。 3.4观察指标 记录小鼠血铅(PbB)、尿铅(PbU)、记忆障碍指标。PbB和PbU测定均用SMP-2型溶出分析（C型）；记忆障碍采用Morris水迷宫法测定。 3.5 统计学方法 数据采用SPSS统计软件进行两组均数t检验。 预期结果 按下表进行数据记录，并对数据采用SPSS统计软件进行两组均数t检验。 表一 模型组和对照组铅离子指标比较 分组 检测指标 对照组 模型A组 模型B组 模型C组 10天组 20天组 10天组 20天组 记忆障碍 平台象限时间 穿越平台次数 PbU PbB