异丙酚对大鼠内毒素血症外周血单核细胞蛋白质表达影响.pdfVIP

硕士研究生：郭远波 指导老师：古妙宁教授 摘要 静脉全麻药异丙酚(propof01)被广泛应用于临床麻醉和ICU镇静。近年来， 异丙酚抑制炎症反应的功能，越来越受到人们的重视，这方面的研究和报道也 日趋增多。但有关异丙酚抗炎的具体信号转导机制，并不清楚，无法形成完整 的理论，从而局限和阻碍了异丙酚抗炎的具体临床应用。 在全身炎症反应中，单核细胞是最重要的效应细胞。因此从血液单核细胞 蛋白质谱入手，作为研究异丙酚抗炎作用机制的重要切入点。既往已经有很多 文献报道，在炎症状况下，异丙酚能够抑制炎症介质IL．1 B，IL一6，TNF．0c的释放， 而对于异丙酚抑制这些炎症因子释放的具体作用机制却知之甚少。本研究从炎 症反应中心环节——血管反应入手，建立内毒素血症大鼠模型，对大鼠血液中 单核细胞蛋白进行双向电泳分析，寻找与炎性反应相关的，受异丙酚调控的蛋 白。 在建立大鼠内毒素血症的基础上，提取外周血单核细胞，并进行裂解，双向 电泳，质谱鉴定蛋白质，并得到表达有差异的蛋白。我们选择与炎症密切相关 的蛋白质膜联蛋白A1(AnnexinA1)，通过重建模型，我们通过westernblot方 法对膜联蛋白A1进行进一步的验证，结果显示与双向电泳结果一致，进一步验 证了膜联蛋白A1在异丙酚抗炎过程中起了重要的作用。同时我们对血清中炎性 A1可以显著的抑制三者 因子IL．1B、IL．6和TNF．Gt并进行检测，发现Annexin 的表达，差异具有统计学意义。膜联蛋白Al在异丙酚抗炎信号转导机制中起了 中文摘要 重要的作用，有研究表明：AnnexinAl强烈抑制细胞IL．6的的表达，此种效应 化的重要一个过程，是一种促进细胞分裂的蛋白激酶。P38通路的激活在前炎性 因子(比如IL—lB，TNF-Q和IL-6)的产生中起了重要作用，对某些酶的诱 导作用，比如环氧化酶2(COX-2)，COX一2可以控制病理条件下结缔组织的塑 形；作为一种氧化作用的调节因子，可以调节iN0的表达；诱导血管细胞粘附 分子一1(vCAM—1)、其他的粘附蛋白以及其他的炎性相关的分子。在内毒素休 克的大鼠模型中，异丙酚对p38MAPK的激活的抑制作用可能是异丙酚减少中性 粒细胞浸润的原因：可以减少内毒素血症大鼠的死亡率并减少他们的细胞因子 反应。 材料和方法： 1．验动物准备与分组： 18只雄性SD大鼠，体重180220 g，均禁食过夜，用乌拉坦(1．09／kg)肌 肉注射麻醉后，行右侧股静脉插管建立静脉输液通道。 照组(C组)，每组6只． 2．动物模型制作及药物输注： L组：通过股静脉注入内毒素10 mg／kg，然后以10mg．kg-lh-1的速度持续 输注10％脂肪乳，持续输注6h． C组：通过股静脉注入与内毒素等容量生理盐水后， 然后以10 mg．kg-lh-1 的速度持续输注l0％脂肪乳，持续输注6h． L+P组：通过股静脉注入内毒素10mg／kg，然后以10mg．kg-lh-1的速度持续 输注异丙酚，持续输注6h． 3．标本采集： 输注药物6h后，分离大鼠右侧颈动脉，取血3-5ml，肝素钠抗凝管抗凝 4．标本处理： 硕士学位论文 (1)将3ml抗凝过的大鼠血加A．N盛有3ml单核细胞分离液的分离管中． 一干净离心管中，加入10mlDPBS，轻轻吹打混匀，2509离心10min (4)重复步骤上一步 (5)按照细胞体积4倍加入裂解液，4C冰箱静置30min， (6)4c离心机、12000rpm，离心15min，取上清液，．80。C冻存． 5。双向电泳 5．1定量 将各组内的裂解细胞混合在一起，采用bradford法进行蛋白定量，参照试剂 盒的说明进行操作。各组蛋白质浓度在1