甘薯茎总RNA的简易高效提取方法.pdfVIP

中圊麈亏通提 2009，25(07)：67—69 ChineseAgriculturalScienceBulletin 甘薯茎总RNA的简易高效提取方法 万 群，贺阳东，阳 淑，袁志祥，熊维全，熊丙全 (成都农业科技职业学院，四川温江610030) 摘 要：介绍了一种快速有效的提取甘薯 IpomoeaBatatas(L．)Lam]茎总RNA的简易方法，无需特殊试剂 和贵重的仪器设备，可有效的去除甘薯中的多酚、多糖类物质。所提取的RNA经过 甲醛凝胶 电泳和紫 外线分光光度计分析，RNA的质量较高，基本没有降解，可直接用于cDNA合成、Northern杂交等多种分 子生物学实验。 关键词：RNA提取；甘薯；电泳 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A AnEasyRNA IsolationM ethodfortheStem ofSweetPOtato WanQun，HeYangdong，YangShu，YuanZhixiang，XiongWeiquan，XiongBingquan (ChengduVocationalCollegeofAgriculturalScienceandTechnology，We~iangSichuan610030) Abstract：A simpleandfastmethodforstem ofsweetpotatoRNA isolationwasdescribedandthemethod doesnotneedthespecialprotocolandexpensiveinstrumentsanditcaneffectivelyremovetheinterferenceof polyphenolandpolysaccharidetheintegrityandpurificationofthetotalRNA extractedwaseligiblebyusing foumaldehydeagelosegelelectrophoresisandUV spectrophotometer．TheRNA canbeusedinmanyfieldsof molecularbiologysuchasthesynhtesisofcDNA andNorthernhybridization． Keywords：RNAisolation。sweetpotato，electrophoresis 甘薯 IpomoeaBatatas(L．)Laml是中国重要的粮食 种材料，由四川农业科学院作物所提供。试验于2005年 和工业原料作物，目前甘薯分子生物学的研究已越来 在四川省农业科学院生物技术核技术研究所进行。 越受到重视。提取不降解的、纯度高的甘薯RNA是进 1．2试剂 行分子克隆、基因表达分析和功能分析等研究的基 异硫氰酸胍、MOPS(3-N．吗林代丙磺酸)。DEPC 础。甘薯富含多酚、多糖类物质，因此去除甘薯体内的 (焦碳酸二乙脂)购 自Sigma。柠檬酸钠、十二烷基肌 多酚、多糖和抑制甘薯体 内RNAase的活性是提取 氨酸钠购 自Sangon，PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，NaAc(醋 I A的关键 。目前国内外不少公司开发了多种类型 酸钠)。 s饱和酚、异丙醇等试剂为国产 。 的提取植物RNA的试剂盒，虽然试剂盒用起来较方 l-3方法 便，但价格昂贵。近年来，关于多酚、多糖类植物RNA 1．3．1设备及仪器的预处理 所有RNA提取的设备仪 的提取有不少的报道 】，但至今未见到关于甘薯RNA 器都应在0．1％的DEPC水溶液中，37℃下浸泡2h，然 提取的报道，为寻找成本低廉、操作简便，且提取质量 后用灭菌水淋洗数次，并于100℃烘烤 15mni，最后在 高的甘薯RNA的方法，笔者参考其他植物的RNA提