嗜碱性芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶分别在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中表达.pdfVIP

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2017-09-01 发布于安徽
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嗜碱性芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶分别在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中表达.pdf

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生物技术通报 ·研究报眚· BlOTEcHNoLOGYBUt正置TIN 2007年第5期嗜碱性芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶分别在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中表达孙同毅陈坤郝继兴路福平杜连祥 (天津市工业徽生物重点实验室天津科技大学生物工程学院，天津姗57) 在太肠杆菌宿主BL2I和枯草芽孢杆菌DBl04中得到袁速。钿s-P^GE分析，重组蛋白酶的分子量为28m。在大肠杆茼，所得酶活为231u／Ⅱll，而在枯革芽抱杆茵，其酶活为1563U／nIl。大概是由于碱性蛋白酶在枯草芽孢杆菌折叠成熟机制与走肠杆茸的不同造成的。关键词：啃碱芽孢杆菌廓|生蛋白酶大脑杆菌枯革芽孢杆菌 oftheGene AlkalineProtea∞PB92fhm Expression Encoding 1in．巴cD髓and丑nc以缸s 曰口cfZ跏s口zc口正叩^订跏s chcnKunHao Lu S岫Tongyi J砒19 FupillgDu蛐g (，撕讯‰y￡曲矿‰☆id腻k础蝴，眺俨矿丑池chD蛔秽，n哑胁№舟奸矿sc据舯e＆‰矗肋增孔面讯300457) A瞻tract：1k ch∞n麟咖缸DNAw器 sequ蚰∞0f咖。Pfotea∞萨nc肌咿ckmcd丘om且矾却舰阳92 jlls盯tedin∞Ec旃vec∞r pE砭2b indh雠Ec以BL21 【+)一Mapr，pwB980-M4pr·懈pec丘坼T1leP‘otc增w越。甲r嘴ed and丑J曲l赫DBl阱， of r。蚪6vely．sDs删如蒯．凼c∞k山吲gbt c曲BL21扭d1 563u／nll c删cd di任h哪nunlr撕∞mechanismbetⅣe蛳且 in且$曲如DBl04．h唧bcb血c j西如mdEc以 p∞tc搿Ec旃矗∞正k Keyword8：舶c越k疵础叩^讲w 碱性蛋白酶是工业酶中用量最多的酶之一，主要应用于加酶洗涤剂，在制革、丝绸、医药、食品、饲料和生物化学试剂等领域制也有广泛的用途。目前用于碱性蛋白酶的生产菌和研究对象主要是枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌及短小芽孢杆菌，但是在工业生产中存在一定的问题．如：地衣芽孢杆菌2709，经过多年的筛选和工艺优化，产量很难提高，酶学性质与生产也不相适应’。本实验所采用的高产高碱碱性蛋白酶菌株为嗜碱性芽孢杆菌(船讲W出却^以m)HAP26，其发酵单位达到了35000u，IIll以上，达到国内外先进水平，具有很大的开发价值。由于嗜碱芽孢杆菌遗传背景、质粒构建和转换方法相关研究甚少．为进一步研究碱性蛋白酶的应用和酶学改造，必须提供了更好的表达平台。作者分别对大肠杆菌表达系统和枯草芽孢杆菌表达系统进行研启动子的枯草芽孢杆菌表达载体pWB9∞，对高效表达碱性蛋白酶进行了探索。收稽日期：20D7坼24 作者简介：孙同毅(1979I)，男，在读博士。研究方向：应用散生物通讯作者：路梧平，lfp@t叫．edlL蛆万方数据万方数据 122 2007年第5期白表达情况。以带有空质粒的宿主菌作对照。菌体经过溶菌酶处理30milI后，用sDs检测。 1．7碱性蛋白酶酶活活力测定