紫花苜蓿-根瘤菌高效共生体筛选及其田间作用效果研究.docVIP

紫花苜蓿-根瘤菌高效共生体筛选及其田间作用效果研究 曾昭海1 隋新华2 胡跃高1陈文新2陈丹明2郜瑞路3 （中国农业大学农学与生物技术学院草业工程研究中心，北京，10094） （中国农业大学生物学院农业部微生物资源及其应用重点实验室，北京，100094） （中国农业大学吴桥试验站，吴桥，） 摘 要 从中国农业大学根瘤菌菌种保藏中心筛选出19株苜蓿根瘤菌，利用河北吴桥的土壤，经温室盆栽实验筛选出适合Vector苜蓿品种的3株高效根瘤菌CCBAU30138、CCBAUN210及CCBAUN96077。并将三株菌进行田间接种效果验证，田间试验结果表明，接种CCBAUCCBAU30138、CCBAUN210和CCBAUN96077后，全年干草产量分别比对照增加11.9％、10.2％和13.73％，单位面积蛋白质产量比对照增产19.63％、 15.63％和13.59％。上述结果说明，通过土壤筛选的高效根瘤菌可以应用到生产中。 关键词：根瘤菌、紫花苜蓿、筛选、田间效果 前 言 提高紫花苜蓿产量最重要的方法是给苜蓿接种高效根瘤菌。该措施可以使共生体从空气中固氮的总量达到200—400kg/ha.（N.A.Provorov et al. 1994）。目前美国有80%的紫花苜蓿在种植之前进行根瘤菌接种。在加拿大和澳大利亚，紫花苜蓿接种根瘤菌技术已经被普遍接受。紫花苜蓿－根瘤菌共生固氮效率涉及到寄主植物、根瘤菌和环境间复杂的互作。完全有效的结合仰赖寄主植物相关基因和根瘤菌相关基因的相容性（Tan，1981）。Dhigg（1978）和Tan（1981）研究结果表明，与紫花苜蓿固氮过程相伴随的乙炔还原率和其它的一些性状受基因控制，Tan（1981）研究还发现，紫花苜蓿乙炔还原率的变异在不同的根瘤菌间差异较大。Tan（1986）揭示各种变异成分对总变异的贡献发现，紫花苜蓿品种变异对总变异的贡献超过30%，根瘤菌菌系的变异占26%，超过36%的变异是紫花苜蓿与根瘤菌的互作引起的。本实验利用华北地区的土壤，在温室条件下对华北地区最近推广的紫花苜蓿品种Vecter进行高效根瘤菌筛选，并将筛选的高效根瘤菌在田间条件下进行进一步验证。以检验该高效菌的接种效果。 材料与方法 1.1材料及其来源 1.1.1品种及其来源：根据近年在黄淮海平原品种比较试验及推广应用现状与前景，选择Vector苜蓿品种，该品种主要由加拿大北极星公司引进。 1.1.2菌株及其来源 表1 供试菌株及其来源 Table 1 . Strains, its host and origin 菌系名称 寄主植物 来源地区 CCBAU25119 紫花苜蓿 山东 CCBAU 25132 紫花苜蓿 山东 CCBAU 25166 紫花苜蓿 山东 CCBAU 3004 紫花苜蓿 河北 CCBAU 30015 紫花苜蓿 河北 CCBAU 30085 天蓝苜蓿 河北 CCBAUCCBAU30138 紫花苜蓿 河北 CCBAU 45236 紫花苜蓿 河南 CCBAU 96068 紫花苜蓿 新疆 CCBAUN96077 紫花苜蓿 新疆 CCBAU 96174 紫花苜蓿 新疆 CCBAU NM006 紫花苜蓿 内蒙 CCBAU NMG024-1 紫花苜蓿 内蒙 CCBAU NMG038-1 紫花苜蓿 内蒙 CCBAU QH180 紫花苜蓿 青海 CCBAU QH401-1 紫花苜蓿 青海 CCBAU SH249 紫花苜蓿 陕西 CCBAU SX080 紫花苜蓿 山西 CCBAUN210 紫花苜蓿 宁夏 1.2温室土壤及试验地概况： 1.2.1温室土壤来源及概况：温室土壤来源于河北省吴桥县中国农业大学实验站，随机选取5个样点，在田间去掉表层3-5cm土壤后进行取样。土壤类型为壤土，pH值为8.3，有机质含量为1.12％，全氮含量为0.092％，速效磷为19.35mg/kg，速效钾为77.91mg/kg。 1.2.2试验地概况：试验地位于中国农业大学吴桥试验站。属黑龙港流域中部。海拔14m，地下水位6—9m，1995—2001年平均降水量为509.6mm，2002年前10个月的总降水量为248.1mm。供试土壤为壤质底粘潮土，地面平坦，土层深厚。耕层土壤有机质含量为0.88%，全氮为0.058%，碱解氮为22.5mg/kg，有效磷为17.1mg/kg，速效钾81.6mg/kg。 1.3研究内容与方法 1.3.1根瘤菌培养：将上述菌株分别平板划线培养，挑起单菌落接种在YMA培养基上，在28℃培养箱中培养72小时，用无菌水洗下根瘤菌体，装入无菌三角瓶中。 1.3.2种子处理及接种：将种子放在培养皿中的纱布上，用无菌水浸湿纱布，放在28℃培养箱中催芽48小时。将从各地取回土壤放入花盆内