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系统性红斑狼疮患者白介素8和肿瘤坏死因子α水平的检测系统性红斑狼疮患者白介素8和肿瘤坏死因子α水平的检测中华皮肤科杂志 1999年第1期第32卷 短篇论著作者：吴秀忠　王应俊　于天周单位：吴秀忠　王应俊　于天周（266300 山东省胶州市解放军第一三五医院皮肤科）我们应用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测了系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子α(TNFα)含量，同时采用免疫组化技术对患者皮损和非皮损区的IL-8进行了观察。现将结果报道如下。一、资料和方法(一)病例选择： SLE患者55例， 均符合美国风湿病协会1982年诊断标准。活动期与稳定期SLE的判断参照陈家福等采用的标准。其中活动期SLE患者32例，男4例，女28例；年龄16～55岁(30.18±13.79岁)。稳定期SLE患者23例，均为有活动病史，治疗后病情稳定的患者(泼尼松40～80mg/d，治疗4周至16个月，症状大多消失)，男2例，女21例；年龄18～54岁(33.16±12.79岁)。采静脉血，取分离后的血清，置－23℃待检。对其中12例患者(活动期、稳定期各6例)取不同部位皮损和非皮损处皮损，10％甲醛液固定，石蜡包埋，常规切片厚5μm。对照组血清取自30例正常人，男5例，女25例；年龄20～52岁(31.27±16.32岁)。外科手术的正常皮肤10份。(二)方法：①双抗体夹心ELISA法：IL-8试剂盒购自军事医学科学院北京邦定医学生物公司。TNFα试剂盒购自解放军总医院东亚免疫技术研究所。实验严格按试剂盒说明书进行。待检血清－23℃冰箱冻存，同批测定。②免疫组化法：切片常规脱蜡、水化；甲醇-H2O2液封闭内源性过氧化酶。滴加兔抗IL-8单抗，湿盒内室温1h；PBS冲洗3次，每次5min；滴加猪抗兔酶标抗体，湿盒内室温30min；DAB显色，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片，光镜观察。(三)统计学处理：实验数据以±s表示，采用两样本均数的t检验进行统计学分析。二、结果(一)IL-8、TNFα检测结果见表1。表1　SLE患者与正常人血清IL-8及TNFα含量组别例数IL-8（ng/ml）TNFα（ng/ml）±st值P值±st值P值对照组305.66±2.864.85〈0.0118.4±4.85.89〈0.01SLE患者组5510.78±5.3726.7±6.9活动期3212.20±5.822.48〈0.0529.3±5.24.93〈0.01稳定期238.74±3.8922.5±4.9(二)免疫组化法显示SLE皮损处IL-8染色强度高于非皮损处皮肤和正常人皮肤，主要分布在表皮的基底层；活动期患者皮损处的染色强度高于稳定期。三、讨论本研究发现活动期SLE患者IL-8水平明显升高，经治疗病情稳定后，IL-8水平降低，活动期与稳定期比较，也有显著性差异。此结果与Holcombe等的报道一致。TNFα主要由单核巨噬细胞合成和分泌，参与自身免疫的炎症过程，是介导自身免疫反应的重要效应因子。我们的研究发现，在活动期患者中TNFα水平明显升高，经治疗病情稳定后TNFα水平降低，此结果与Prokop′ev等报道一致。Yap等研究了TNFα在SLE发生中的作用，细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)抗原表达是它与激活的T淋巴细胞相互反应的先决条件，而SLE患者血清能够选择性地上调培养的人脐静脉内皮细胞上MHC-Ⅰ类抗原表达，而不诱导MHC-Ⅱ类抗原表达，且其刺激指数明显高于正常人血清或其它病患者血清。活动期SLE患者的平均刺激指数高于非活动期患者。参　考　文　献 陈家福, 殷志伟, 冯树一, 等. SLE患者白细胞介素6活性的研究. 中华皮肤科杂志, 1993,26:32-34. Holcombe RF, Beathge BA, Wolf RE, et al. Correlation of serum interleukin-8 and cell surface lysosome-associated membrane protein expression with clinical disease activity in systemic lupus erythematosus. Lupus, 1994,3:97-106. Jacob CO. Studies on the role of tumor necrosis factor in murine and human autoimmunity. J Autoimmun, 1992,5 Suppl A:133-143. Prokop′ev AA, Alekseeva TG, Zimina ZV, et al. The level of the tumor necrosis factor