可溶性肿瘤坏死因子受体55在2型糖尿病消瘦型人群表达及发病机理研究.pdfVIP

实验对象 住院及专科门诊2型糖尿病人40例，年龄在40．55岁之间，诊断糖尿 系感染，肺感染，在一个月内未发生糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症， 通过病史，体检、心电图、眼底检查及荧光造影及神经传导等辅助检查排除 瘦的病人。 实验材料 一、试剂人sTNF—R巧定量E1A试剂盒，购于上海森雄科技实业有限公 司 二、实验仪器离心机，酶标仪等。 实验方法 一、血清sTNFRs5测定 (一)原理最常用的是双抗体夹心法测sTNFR。其基本原理是选择两 sTNFR 2(anti 之反应，然后加入标记的McAb2，标记物常用酶，同位素，生物素等。通过 ·2· 36-+0．8ng／ml。 (--)步骤 1．48孔微孔板，已包被抗人sTNFR5，抗单抗(McAbl)。 2．收集血液标本，采集血清一20。C保存，试验前一次性融解。 3．建立标准曲线，设标准孔8孔，每孔中加入样品稀释液100一，第一 孔加标准品1001xl，混匀后用加样器吸出100止，移至第二孔，如此反复作对 倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100山弃去，使之体积均为100fxl， 第八孔为空白对照。 4．加样，待测品孔中每孔加入样品稀释液及待测血清各50出共40孔， 其中消瘦组22孔，肥胖组18孔。 (McAbl)结合。 6．充分洗板后，每孔中加入第一抗体工作液50出，加入生物素化的抗 人sTNFRs，抗体形成免疫复合物连接在板上。 7．充分混匀后置37。C60分钟反应。 8．洗板后加酶标抗体工作液，置37。C60分钟，辣根过氧化物酶标记的 streptaridin与生物素结合即标记的McAb2被加入其中。 钟，出现黄色。 10．每孔中加入终止液硫酸混匀。 11．在490rim处测吸光值。 (三)以标准品之吸光值画出标准曲线，查出相应人sTNFR，；含量。 二、GAD．Ab测定来源临床内分泌实验室的定性分析 三、统计学处理 GAD，Ab用定性分析表示，其他数据以均数±标准差(曼±s)表示，组间 比较采用t检验处理，两变量间相关采用2×2列联表资料的x2检验处理。 ·3· 实验结果 63±52．05 nMol／L)明显低于肥胖组(582．37±97．20 nMol／L)，差别有统计 学意义(P0．05)。 二、在消瘦组中sTNFR：，明显远离标准曲线的有4例(吸光值分别为2． 及9％，比较两变量认为两检验方法有相关联系，均同消瘦组相关性强。 讨 论 TNF主要是由活性巨噬细胞和淋巴细胞产生的具有细胞毒作用的多 肽。TNF诱导的各种免疫反应是通过细胞表面两类特异性受体相互作用产 用。TNF的可溶性受体可在病人的体液中检测，一般由两条途径产生：一是 膜受体蛋白酶水解，从胞外区细胞膜表面脱落产生，二是由受体mRNA产 物不同剪接方式产生的TNFR分泌至胞外。研究结果显示2型糖尿病消瘦 性率比较，认为两种检验方法无明显差异，有相关联系。因此可以推测2型 糖尿病消瘦型的病因可能是有别于肥胖型2型糖尿病的免疫因素，有其独 立的免疫性炎症学说参与。可能由sTNFR，。协同TNF参与免疫炎症细胞同 B细胞之间相互反应，产生自身免疫损伤。由于2型糖尿病是异质性疾病， 用于消瘦型2型糖尿病病因学探讨研究。同时对2型糖尿病消瘦型的治 疗，提供方法学方面的指导。 ·直· 结 论 2型糖尿病是异质性疾病，在2型糖尿病中同样存在着免疫因素的参 与，2型糖尿病的免疫炎症的参与，主要体现在消瘦型人群，其很可能存在 有别于肥胖型的2型糖尿病的独立的免疫因素，ll缶床有必要监测血清s’矾．