人未成熟卵母细胞在T199和P1两种培养体系体外成熟的初步研究.pdf

墨主兰竺兰圣 全圭墨登竺竺竺墨查坠塑竺：!苎兰兰苎兰至竺尘墨垫兰竺=2墨土兰苎苎 体外DO成熟的研究是十分迫切和必要的。卵母细胞的自身代谢尚需要不断的研究 和探索；实际科研和工作中，经常会遇到许多DO。每个单精子卵胞浆内注射 vitro maturation，IVF)一 (intracytoplasmicsperminjection，ICSI)周期，与体外受精(In 样大约都会有15％一20％的未成熟卵母细胞。培养DO优势还在于它能够避免颗粒细胞 对卵母细胞成熟度的观察的干扰，有利于探讨IVM的培养时间。 目前，IVM的研究存在的问题之一是：培养体系的优化。本课题在以往的研究基础 之上，应用T199和P1两种培养体系，从40岁以下，既往月经规律，10mm以下的卵 泡获取的未成熟卵母细胞，分为自然周期、孕期和促排周期进行OCC或DO培养，通 过观察其成熟率，第一极体的形态，及成熟时间(DO组)上的差异，摸索OCC或DO 的适宜的培养体系。同时通过自然周期、孕期和促排周期GV期卵母细胞以上各项指标， 比较不同来源途径的IVM的区别。 材料与方法 1．标本来源：因妇科良性病变(包括卵巢巧克力囊肿、子宫内膜异位症、卵巢畸胎瘤) 而切除的卵巢标本，或其它妇产科开腹手术(子宫肌瘤、黄体破裂和剖宫产)直视 穿刺卵泡及ICSI获得未成熟卵母细胞。共获得184颗符合标准的未成熟卵，其中 48颗来源于自然周期；120颗孕期；16颗来自促排周期。 Pergonal(0．15IU／m1)、Profasi(0 酰胺(1mm01)。 3．不成熟卵母细胞的收集标准：OCC两层以上的完整的卵丘细胞紧密包绕，外观颜色 正常：DO细胞质颜色正常，颗粒均匀，胞膜光、滑，卵周隙正常。 4．不成熟卵母细胞的收集方法 ①切除的卵巢组织分离 ②术中直视穿刺窦卵泡(卵泡直径均10mm) ⑨ICSI时发现的未成熟卵母细胞。 ④D0制备：OCC酶解或机械法去颗粒细胞 5． 实验分组：将相同来源的符合标准的OCC或DO随机置入T199或PI培养体系进 行培养。 TOCC：用T199培养体系培养OCC POCC：用P1培养体系培养OCC TDO：用T199培养体系培养DO 硕士掌位论文 人未成熟卵母细胞大T199和P1两种培养体系体外成熟的初步研究 中文摘要 PDO：用P1培养体系培养DO 6．不成熟卵母细胞的体外培养方法：将未成熟卵置入30ul的培养液滴中单独培养，放入 37℃5％C02饱和湿度的培养箱内，于24，48，72小时在高倍显微镜下观察卵母细 胞的成熟情况。 7．观察指标：卵母细胞的成熟率、第一极体的形态分级和DO的成熟时间 8．统计方法：11，0 结果 具有统计学意义。前者的完整极体比例略高于后者，分别为60．9％和50．O％，但无 统计学差异(P0．05)。 组(40．O％)，具有统计学意义。 每组不同培养时间成熟率比较无差别，48小时的成熟率几乎与72小时相等。 4．不同来源的GV期DO培养结果比较：促排周期组GVBD率、成熟率均最高(93．8％ 50．O％。自 50．O％，40．0％Lt 和自然周期组GVBD率、成熟率无差别，分别为43．3％tg 然周期组、孕期组和促排周期组成熟的卵母细胞完整极体率为40％，58．3％和50．O％， 未见统计学差异。 结论 1．OCC或DO的体外培养应选择不同的培养体系：OCC较适宜在T199培养体系中培 养：DO较适宜在Pl培养体系中培养并且培养时间不易超过48小时； 2．缩短体外成熟时间并未明显降低DO的成熟率： 3．促排周期GV期DO的GVBD率最高，成熟率较孕期高；孕期和自然周期GVBD率、 成熟率无差别；三者成熟的卵母细胞完整极体率无差别。 4．三种来源的GV期DO成熟速率尚未见统计学差别，但促排周期最