妊高征孕妇血清一氧化氮与雌三醇水平的相关性研究.pdfVIP

实验过程方法 一、病例选择及分组 在济南市妇幼保健院住院的病人，诊断标准以《妇产科学第4 版[3]为准，包括轻度妊高征16例，中度妊高征7例及重度妊高征 27例。 2．正常晚期妊娠对照组(对照组)：50例，系同期在济南市妇 幼保健院住院的晚期妊娠健康孕妇。 二、标本采集 妊高征组在病人住院后未经硫酸镁及其他药物治疗前(包括 院外亦未接受硫酸镁及其他药物治疗)，取空腹肘静脉血3m|，自 凝后离取血清，立即置冰箱冷冻保存待测；对照组亦取空腹肘静脉 血3ml离取血清立即放冰箱冷冻保存待测。两组同时测定其 N凸一／Nq一和B含量。 三、检测方法 1．NO测定 NO的最终代谢产物是亚硝酸基／硝酸基(NCh一／N03一)，本 实验采用南京聚力生物医学工程研究所生产的NO试剂盒，用硝 酸还原酶法，特异性地将N03一还原为N02一，再通过其显色深浅， 反映出NO浓度的高低。本方法具有简便、特异、样品不需去蛋白 等优点，并且为全自动生化分析。试剂盒组成：试剂1 6．6mlXl 瓶j试剂2冻干品三瓶，一20℃保存，临用前每瓶加1．1ml双蒸 水复溶，此液为硝酸还原酶悬浮液，剩余酶液置一20℃保存，仍可 继续使用；试剂3 33ml×1瓶；试剂4 33ml×1瓶。标准液：1 支，100呷ot／L，每支0．5ml。操作步骤：(1)取试管3支分别为标 ——1—— 1，靠近液面上方加50／A试剂2，用旋涡混合器充分混匀，置37℃ 分钟，540nm波长，0．5cm比色杯，B管调零，测各管消光值。(3) 计算：NOprnol+／L=蕤蒜箍X100。 2．E3测定 本实验采用天津九鼎医学生物工程有限公司生产的总雌三醇 放射免疫测定试剂盒(E3一RIAKIT)。原理：待测样品，质探血清 和标准物，125I标记E，分别与定量的E3抗体反应。形成抗原抗 体复合物，此时结合的125I—E3量与标本中E3的浓度成反比。 用第二抗体及沉淀加速剂将标记的抗原抗体复合物与游离的 标记抗原分离，弃上清后用r一计数器测量各管中沉淀物的放射 性强度，质控血清及待测标本中的E3含量，在由已知浓度标准物 所做的标准曲线上查出。试剂盒的组成：(1)125I—E、溶液，含放 一8℃保存有效期内稳定；(2)E3抗体，在磷酸盐缓冲液中含兔抗 人E3抗血清及NaN3，2℃一8℃保存有效期内稳定；(3)E3标准 0．1％NaN3，2℃一8℃保存至少八周稳定一20℃保存有效期内稳 定；(4)E3质控血清：含正常和高浓度人E3血清及0．1％NaN，， 2℃一8℃保存至少八周稳定，一20℃保存有效内稳定；(5)沉淀抗 体溶液：在PEG溶液中含驴抗兔抗体及NaN，，2℃一8℃保存有效 期内稳定。操作步骤：先在12×75ram的聚丙烯试管上编号，然 后按下列程序进行操作： 结果计算： (1)计算每对试管CPM的均值(先扣除本底)。 (2)按下列方法计算各种标准物，质控血清和待测样品的B／ B0％。 B／Bo％=(B—NSB)／(B0一NSB)×100 B=每对试管CPM的均值 B0=0标准物CPM的均值 NSB=NSB双管CPM的均值 (3)以各种标准物的B／B0为纵轴，浓度为横轴，在logit—log 坐标纸上，绘制剂量反应标准曲线。 (4)待测血清和质控血清中E3含量可在上述标准曲线上查 出。 四、统计学处理 实验结果采用目前世界著名的SAS统计软件进行分析。 结 果 一、两组NO、E3测定结果 两组NO、E3临床记录及原始测定结果见表1。 表l两组NO、E3临床记录及原始ilil定结l(NO：umol／L E3：ng／Inl) D OBS矧ZYHCLASS OBS矾扒H D NO岛 CLASSNO