2015届高考生物总复习考点3《血红蛋白的提取与分离》新人教版.docVIP

考点3　血红蛋白的提取与分离　(对应学生用书P250) 1．血红蛋白的提取和分离原理 蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 2．常用的蛋白质分离方法 (1)凝胶色谱法 ①识图 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②分析比较列表如下： 蛋白质 比较　　　 相对分子质量大 相对分子质量小 凝胶内部 排阻在凝胶颗粒外面，迅速通过 进入凝胶颗粒内部，被滞留 运动方式 垂直向下 垂直向下和无规则扩散运动 运动路程 较短 较长 洗脱次序 先流出 后流出 (2)电泳法原理 ①在一定pH下，一些生物大分子(如多肽、核酸等)可解离的基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ②由于分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。 3．血红蛋白的提取和分离过程 4．结果分析与评价 (1)血红蛋白的提取和分离时红细胞分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 (2)凝胶的装填标准是紧密、均匀。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 (3)G－75：“G”代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范 围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。 (4)装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的是使凝胶装填紧密。 (5)实验过程中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固；低速、短时离心防止白细胞沉淀；缓慢搅拌防止红细胞破裂释放出血红蛋白。 (6)检测血红蛋白的分离是否成功的方法：如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 易错警示！ “血红蛋白的提取和分离实验”中的注意事项 (1)红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 (2)凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 (3)色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 (4)色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。 思维激活 　判断正误 (1)利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量小的先洗脱出来(　　)。 (2)在电泳过程中，蛋白质分子的移动速度，与分子本身的大小和形状无关，而与所带电荷的差异有关(　　)。 (3)在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳中，电泳迁移率完全取决于分子的大小(　　)。 答案　(1)×　(2)×　(3)× 　血红蛋白提取和分离过程的考查 (2011·广东理综，5)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是(　　)。 A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢 解析　猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯的血红蛋白时用凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。 答案　D [对点强化] 红细胞中含有大量的血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验来提取和分离血红蛋白。下列关于血红蛋白提取和分离的叙述，错误的是(　　)。 A．血红蛋白提取和分离一般按照样品处理―→粗分离―→纯化―→纯度鉴定的顺序进行 B．纯化过程中要用生理盐水充分溶胀凝胶来配制凝胶悬浮液 C．粗分离中透析的目的是去除相对分子质量较小的杂质 D．可经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定 解析　蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。提取和分离血红蛋白时，首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品处理；再通过透析法除去相对分子质量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂蛋白除去，即样品纯化，纯