Ezrin-WWOX相互作用生化的研究.pdfVIP

Ezrin-WWOX 相互作用生化研究∗ † † 金长江 , 葛玲 , 朱红玲, 吴芳, 曹新旺, 王琪琛, 姚雪彪 （中国科学技术大学细胞动力学实验室；合肥微尺度物质科学国家实验室 230027） E-mail: yaoxb@ 摘 要：ezrin-radixin-moesin 家族的蛋白质调控地连接着膜蛋白与细胞骨架，并且参与 信号传导通路。Ezrin 位于泌酸细胞的顶膜参与耦连 cAMP蛋白激酶激活与壁细胞的酸分泌。 我们最近的研究鉴定出由 PKA 介导的 ezrin 磷酸化位点 Ser66 并且确定了该磷酸化位点在壁 细胞活化中的功能(Zhou et al., 2003, J. Biol. Chem. 278, 35651-35659)。这里我们报 道一个新的ezrin结合蛋白质WWOX, WWOX是一个含有2个WW结构域的潜在的肿瘤抑制基因。 我们的生化研究发现 PKA 介导的 ezrin 磷酸化位点 Ser66 状态调控着 ezrin-WWOX 之间的相 互作用。系统研究揭示 ezrin-WWOX 之间的相互作用是通过 ezrin C 端的 PPVY 序列与 WWOX 的第一个 WW结构域相互结来介导。我们的定点突变实验进一步证实 ezrin的 tyrosine477 是 对于 ezrin-WWOX 之间的相互作用必不可少的。鉴于实验报道 tyrosine477 是酪胺酸激酶 Src 的一个底物 (Heiska and Carpen. 2005, J. Biol. Chem. 280, 10244-10252), 这些综合 结果表明Src和PKA介导的磷酸化可通过调控ezrin与WWOX的结合来改变细胞动力学特征。 关键词：Ezrin WWOX PPxY WW结构域 1．引言 上皮组织的功能依赖于单个上皮细胞的极化组成的结构。建立与维持完全极化的形态涉 及到一系列事件，包括细胞与细胞的粘连、横向皮层复合物的聚集、细胞骨架的重组以及运 输囊泡极化靶到顶膜和底膜 (1)。Ezrin是ezrin/radixin/moesin (ERM) 家族成员之一，与 actin结合，连接着细胞膜与骨架(2)。在胃的上皮组织中，ezrin 普遍存在于泌酸细胞中并 且主要位于这些细胞的微绒毛的顶膜上(参见3-4)。我们先前的研究表明胃中的ezrin和 β-actin异构在体内分布相同(5)，并且选择性的与β-actin 异构在体外结合(6)。因为观察 到ezrin刺激依赖的磷酸化以及细胞定位的变化，曾经有人假设壁细胞分泌中ezrin到达顶膜 重构是与PKA的活性相对应的(参见4)。最近我们在ezrin上找到了由PKA介导的磷酸化位点， 并且确定了该磷酸化位点在调控ezrin在胃酸分泌中的功能(7)。然而，我们仍然不清楚怎么 把PKA介导的磷酸化和ezrin在壁细胞活化过程参与顶膜与骨架重构的功能联系在一起。 WWOX （WW domain containing oxidoreductase ）是最近被发现的一个潜在的肿瘤抑制 基因，它含有9个外显子，编码414氨基酸, 基因跨越常染色体脆性位点处(8, 9) 。WWOX 包 含有2个WW结构域，以及一个与短链脱氢酶高度同源的结构域，这个结构域可能与性激素 新陈代谢有关。WW 结构域的功能是通过介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用而起着细胞 内信号传递作用(参见10)。目前有四个类型的WW结构域，它们结合不同的含有聚脯氨酸或 者脯氨酸配基。已经有报道的研究表明与WWOX 的WW 结构域结合的配基是PPxY 序列 (11-15) 。利用大密度的蛋白质点阵方法，Ludes-Meyers等鉴定出5个潜在的WWOX结合蛋白 ∗本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20020358051 ）资助 †同等贡献 - 1 - 质，每个蛋白质至少含有一个PPxY序列(11) 。Croce研究组发现WWOX通过p73和AP-2γ的 PPxY序列与它们结合，这种结合抑制它们的转录活性(