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王烈峰项士论文
以B一淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体
的构建和表达
学科专业： 人体解剖与组织胚胎学
硕士生： 王烈蜂
导 师： 姚志彬教授
摘 要
Disease，
B一淀粉样蛋白(A1342)异常聚集和沉积是老年性痴呆(Alzheimer’S
AD)的主要病理改变“一，1999年Schenk．D发现以A1342为抗原接种AD转基因
模型鼠可产生抗AB也抗体，可以清除或减少鼠脑A1342的异常聚集和沉积，鼠血、
脑AB水平明显下降”1。进～步临床试验因部分受试者出现脑脊髓膜炎症状而被
1．42、
迫中止“3。为寻找更安全、有效、廉价的治疗方案，本室构建了pcDNA3．1一AB
1342主动免疫清除老年斑的作用
B42。2真核表达质粒，为进一步研究A
pcDNA3．1．A
机理和DNA疫苗的研制奠定基础。
一、T92576转基因鼠基因组DNA的提取和目的基因扩增
饱和酚／氯仿法鼠尾提取T92576转基因鼠基因组DNA，根据其基因序列，
设计出扩增编码A13基因的引物，以基因组DNA为模板经PCR扩增目的基因片
层}AB 42．1、AB42-2。
l-42、AB
B B42x2的构建及鉴定
二、真核表达载体pcDNA3．1．Al-42．pcDNA3．1．A
将目的基因片段AB1_42纯化后与质粒peDNA3．1分别用限制性内切酶
I、XhoI酶切、纯化后用T4DNA连接酶将目的基因片段定向克隆至质粒
Kpn
王燕峰磺士论支
1-42，将目的基因片段
pcDNA3．1的多克隆位点间，得到藏组质粒pcDNA3．卜AB
l瓣切、
A§啦-|缝纯嚣与囊粒peDNA3。1分裂薅嚣耪隈剁拣内切酶K秽l、BamH
纯化艏用T4DNA连按酶将目的基阂片段AB
42，l定向克隆至质粒pcDNA3．1的多
B 1342-2纯化后
42-1稀将目的基因片段A
克隆位点问，得到重缀质粒pcDNA3+l-A
l懿甥、
l、Xho
与重缀激粒pcDNA3，l诅15鸵。1分嬲躅薅秘限铡蠛痰镪酶BamH
842．t
纯化后阁T4DNA连横酶将目的基阙片段定向究豫至重组质糙pcDNA3．1-A
B艄咖将重组碰粒转化大肠杆菌
的多克隧位点间，得到重组质粒peDNA3．1．A
DH5《，分裂爱稳应戆双薅酶翡及溅穿涯实该黧缍矮蕴稳建残功。
13 1342x2的真核表达
l船pcDNA3．1-A
三、peDNA3．1。A
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