铝对豌豆根边缘细胞存活率和粘胶层厚度与影响.docVIP

铝对豌豆根边缘细胞存活率和粘胶层厚度的影响 冯英明，喻 敏*，温海祥，，， pH4.5）与离体豌豆(Pisum Sativum)根边缘细胞共培养1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、24 h后根边缘细胞存活率、粘胶层厚度及细胞数量的变化，以揭示铝毒胁迫边缘细胞的响应。结果为：随着处理时间的延长，边缘细胞的存活率明显下降；在0~100 (mol/L铝浓度范围，边缘细胞存活率有随铝浓度升高而降低的趋势；8 h及24 h边缘细胞存活率为铝浓度500 (mol/L时显著高于0、50、100和250 (mol/L时，6 h边缘细胞存活率为250和500 (mol/L铝浓度时显著高于0、50、100 (mol/L AlCl3时。随处理时间延长，边缘细胞数量降低，铝浓度100，250和500 (mol/L时边缘细胞数量低于0和50 (mol/L时，且铝浓度越高，细胞数量越少；随处理时间延长和铝浓度升高，粘胶层相对面积增加，铝浓度500和250 (mol/L时粘胶层相对面积增加尤为明显。通过与pH 7.01水溶液及pH 4.50水溶液中粘胶层变化的比较，发现粘胶层在铝处理8 h后出现一个峰值，可能是粘胶物质的诱导合成和分泌。研究结果表明，铝毒对根边缘细胞具有致死效应，这种致死效应在一定浓度范围符合剂量依数性关系，高浓度时则边缘细胞存活率反而升高，这与根边缘细胞对铝毒作出的适应性响应——粘胶层的增厚和细胞降解增强有关。粘胶层起着保护和减轻边缘细胞铝毒的作用。 关键词：豌豆；根边缘细胞；铝毒；粘胶层；存活率 中图分类号：Q945.78 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2005）05-0695-05根边缘细胞（Root border cells）是从根冠表皮游离出来并聚集在根尖周围的一群特殊细胞，其发育是受遗传调控，并在逆境中起着多种生物学功能。Hawes等（1990）将这类细胞称为根边缘细胞（Root border cells），以强调这类细胞是位于根表面与土壤之间、有生物活性的生物边界层（biotic boundary layer）。边缘细胞从根冠产生后，即发挥多方面的功能如影响根际微生态系统，抑制病源菌的侵入，减少根系机械阻力，保护根尖等[1-3]。边缘细胞产生后如何发挥这些作用，是一个值得探讨的问题。 铝毒是酸性土壤限制作物生长的主要原因，许多作物对微浓度的铝就发生毒害反应。目前世界上超过40%农用耕地受到铝毒的危害[4]。铝对根系生长的主要毒害作用部位是根尖,研究表明根尖区分泌物能够限制铝向分生组织穿透[5]。而根边缘细胞、根边缘细胞产生过程的细胞壁碎片和边缘细胞分泌物组成的粘胶层等通常占一个健康根系总的分泌物的98％[6]，在铝毒响应中可能有重要作用。而通常对粘胶层在铝毒作用中所起的作用的研究，侧重于有机酸和其它一些大分子物质，而具有新陈代谢活性的根边缘细胞被忽略了。根边缘细胞从根尖脱离后即能单个生存，并可以在遭受逆境时形成一个独立的胞际空间[7]。通过研究铝毒胁迫下根边缘细胞数量和存活率及粘胶层的变化，揭示边缘细胞铝毒胁迫的响应，可以从细胞水平阐述铝毒机理。 1 材料与方法 1.1 豌豆种子的前处理及边缘细胞培养 中豌五号豌豆(Pisum Sativum)种子，首先用φ=95%乙醇（AR）浸泡10 min，用w=7.5%的次氯酸钠（AR）浸泡30 min，然后用无菌超纯水（来自Minipore ZMQS50FOY超纯水制备系统）清洗6次，每次清洗持续5 min，以去除漂浮、膨胀、软化和表面不一致的及被污染的种子，然后在超纯水中浸泡6 h，种子均匀放入无菌根边缘细胞雾培箱，用含0.1 mmol/L CaCl2超纯水溶液喷雾培养48 h，收集根边缘细胞进行以下试验。 1.2 铝对根边缘细胞存活率和数量的影响 收集到根边缘细胞，分别加入0、50、100、250、500 (mol/L（含 0.1 mmol/L CaCl2, pH 4.5）AlCl3溶液，培养1、2、4、6、8、24 h后检测细胞存活率和细胞数量，重复4次，每个重复测定10个细胞。 1.3 铝对根边缘细胞粘胶层的影响 收集到根边缘细胞，分别加入0、50、100、250、500 (mol/L（含0.1 mmol/L CaCl2, pH4.5）AlCl3溶液及超纯水，培养1、2、4、6、8、24 h后检测粘胶层相对面积，重复4次，每个重复测定10个细胞。并在铝处理2 h时用Nikon(E600)成像系统对边缘细胞及其粘胶层进行显微摄影。 1.4 检测方法 1.3.1 边缘细胞数量和存活率的测定 取反应完毕细胞培养液，每100 μL加入30 μL w=0.5%的台盼蓝染色15 min，吸取5 μL均匀平铺在