实验十叶绿素a和b含量的测定.docVIP

实验十? 叶绿素a和b含量的测定（分光光度法） 一、目的 ??? 学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。 二、原理 根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。 乙醇溶液中叶绿素a、b在长波光方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K（溶液厚度是1cm,溶液浓度为1g/L的吸光度）为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，它们的浓度C与光度之间有如下的关系： A649 = 24.54 Ca + 44.24 Cb…………………………….(2) (1)(2)式中的A665、A649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。 Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。 83.31、18.60为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。 24.54、44.24为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。 解方程式(1)(2)，则得 ： CA = 13.7 A665 - 5.76 A64