APP+apzIVA基因序列特性及rApzIVA%2frTbpB亚单位复合菌苗对小鼠的免疫研究.pdfVIP

猪的传染病一猪细菌病 小鼠的免疫研究 杨剃2曹三杰黄小波文心田 (四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室，四川 雅安 625014) 关冀词胸膜肺炎放线杆菌；亚单位疫苗；重复序列；ApxⅣA； 猪传染性胸膜肺炎(尸b陀加已加向c砌“s 疾病发生的重要原因。由于引起PIPs的病原血清型众多，毒力因子构成复杂，不同血清型细菌毒力 因子构成不同，使疫苗免疫难以达到令人满意的效果。 铁蛋白结合蛋白B)对灭活疫苗免疫效果的影响为目的。研究从分析基因序列特性开始，采用PCR 方法成功扩增APP血清l型口口彬讼基因5’端两个特征性氨基酸序列(N端疏水性区域和中部乙酰化位 mmol／L IPTG浓度条件下诱导3 rApxIVAl和r1飞pB具有良好的抗体反应原性，rApxIVA2的抗体反应原性很弱。 rApxI、纨l和r，rbpB作为亚单位疫苗按25“∥只／次的剂量分三次免疫小鼠，每次间隔两周，抗体监 测结果表明两种重组蛋白单独或者是联合免疫小鼠都能诱导机体快速产生高水平抗体，在二免两周 后抗体水平就达到活菌感染诱导机体产生的抗体水平。用APPl型4074株培养物制备灭活疫苗免疫小 鼠(4×108CFU／只)，免疫方法同重组蛋白。抗体监测结果表明灭活疫苗免疫小鼠能诱导机体产生 亚单位复合菌苗免疫小鼠，抗体监测结果表明，灭活苗不会影响重组蛋白诱导机体产生抗体的能力； 重组蛋白的添加，会干扰灭活疫苗中部分抗原诱导机体产生抗体的能力。在所检测抗体中，灭活疫 苗诱导Apxl和LPSl抗体产生的能力受重组蛋白的影响比较明显，ApxII抗体产生能力不受影响。三 免后MTT法分析各免疫组小鼠脾细胞增殖能力，结果表明重组蛋白的添加量对脾细胞增殖能力有影 组小鼠脾细胞增殖能力低于50昭免疫组；25熠免疫组中，不同重组蛋白免疫效果差异不明显；在所 有免疫组中，灭活苗免疫组小鼠脾细胞增殖能力最弱。 攻毒试验结果表明，重组蛋白对同型(1型)细菌攻毒具有一定的免疫保护作用，rrbpB亚单位 疫苗免疫能提供30％的保护率，rApxIVAl亚单位疫苗免疫能提供20％的保护率，两者联合免疫能提 护率均为60％；与两种蛋白联合免疫提供的保护率为80％，重组蛋白能提高灭活疫苗的免疫保护率。 对攻毒后死亡小鼠肺脏和存活一周的小鼠肺脏带菌量进行定量检测，结果表明不同疫苗免疫对APP 的清除率不同。mpB免疫有助于降低肺脏带菌量，灭活疫苗免疫组小鼠肺脏带菌量在攻毒后一周变 化不明显，rApxIvAl免疫组小鼠肺脏带菌量在攻毒后一周出现明显上升。对于不同血清型(6型) 攻毒，研究中所使用疫苗免疫后都不能产生很好的保护作用，除rApxIVA／汀bpB亚单位复合菌苗免疫 组有一只小鼠存活外，其余均在攻毒后死亡。 在对印时讼基因3’端片段的克隆研究中，发现该片段在基因组外复制时具有特殊性，即PCR扩增 有多条产物带形成，回收片段T克隆后片段长度变短。序列分析表明，印村讼基因霞复区域序列由4 个重复单元组成，长度分别为159bp、144bp、135bp和84 基因中的排列方式可以表示为【(Pl“bp)(P159bp)(P135 bp)(P84bp)(P144bp)(P135bp)】n bp)】。【(Pl“bp)(P159 bp)(P159 0r1、 (P144b口)(m=0n1)。在紧邻重复区域的序列中设计引物扩增该重复区域，电泳显示PCR扩 增能形成多种产物。回收1型4074株扩增产物中约1800 bp、1200bp和600bp的三种片段，与pGMT连 2基金项目：教育部长江学者和创新团队发展计划项目(m朋848)资助；四川省重点项目(200620每001．02)资助 906 第十三次学术研讨会会议论文集 入片段核酸序列为扩增区序列的一部分，具体为上游引物结合位点到重复区之间39 bp、下游引物结 合位点到重复区36 bp和144bp重复单元在3’末端的一个重复。T克隆结果表明