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抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化酶活性的测定.ppt
2 * * 抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化 酶活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院 一、实验目的: 掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法，使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。 二、实验原理 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量表示抗坏血酸氧化酶的活性： + O2 1 2 抗坏血酸氧化酶 抗坏血酸 脱氢抗坏血酸 H2O C O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO + 抗坏血酸 + 脱氢抗坏血酸 2HI C O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO I2 + 利用碘液滴定剩余抗坏血酸 儿茶酚＋O2 儿茶醌＋H2O 多酚氧化酶 儿茶醌+抗坏血酸→儿茶酚＋脱氢抗坏血酸 利用 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量间接表示多酚氧化酶的活性： 梨果肉 三、实验材料 四、实验步骤 1．酶液提取 2．酶活性的测定（按下表配制反应体系） 1 2 1 1 2 3 6 1 2 1 2 3 5 1 2 1 2 3 4 1 2 1 2 4 3 1 2 2 4 2 1 2 2 4 1 偏磷酸 (保温一定时间后) 酶溶液 偏磷酸 焦儿茶酚 抗坏血酸 缓冲液 瓶 号 (1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算： 抗坏血酸氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[ V′-( V 1- V 2)] ×0.44 (V/a)/(w×a) 式中：V′=滴定3号空白所用去的碘液毫升数； V1=滴定1号瓶所用去的碘液毫升数； V2=滴定2号瓶所用去的碘液毫升数； 0.44=每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数； V=提取液总体积（ml）； a=测定时所用提取液的ml数 w＝样品鲜重(g) t＝测定时间(分)。 五、试验结果 (2)多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[(V″- ( V3 +V4 ))/2-(V′-(V1+V2))/2]×0.44×(V/a)/(W×t) 式中，V〞＝滴定6号空白用去的碘液毫升数； V3 ＝滴定4号瓶用去的碘液毫升数； V4 ＝滴定5号瓶用去的碘液毫升数； 其余符号意义同前。 * * * *
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