富硒巴西蘑菇菌丝胞外酶活性研究.pdfVIP

福建武夷山 第九届全国药用真菌学术会议暨药用真菌专业组织成立三十周年庆 2009年lO月 富硒巴西蘑菇菌丝胞外酶活性研究 杨淑云，杨永彬，羿红，朱明贞 (福建省食用菌技术推广总站，福州350003) 摘要：采用含梯度浓度硒的液体培养基培养巴西蘑菇菌丝体，研究菌丝胞外蛋白酶、淀粉酶、羧甲基纤 维素酶、半纤维素酶、漆酶和愈创木酚氧化酶的活性变化。结果表明，添加适当浓度的硒对巴西蘑菇菌丝 这6种胞外酶的活性均有促进作用，其中淀粉酶活力的最适硒浓度是lOpg·mL一，其它5种酶活力的最适硒 浓度均是2099·mL1：低于最适硒浓度时，硒对酶活性的促进作用随羞硒浓度的增大丽增强，高于最适硒浓 度时，硒对酶活性的促进作Hj逐渐降低，并最终产生抑制作用。 ． 关键词：巴西蘑菇；淀粉酶；蛋白酶：羧甲基纤维素酶；半纤维索酶；漆酶；愈创木酚氧化酶 硒是人体必需的微量元素之一，具有防治肿瘤、克山病、大骨节病和防癌抗癌及延缓机 体衰老的作用，有研究表明，生物源有机硒在生理和药理上的功效都较无机硒优越，且对人 体安全无毒副作用Ilj。食用菌等微生物具有富集硒并将其转化为生物源有机硒的能力，近年 来采用食用菌液体发酵手段富集硒成为硒保健品开发领域的研究热点之一【2】。巴西蘑菇 blazei Murrill．)作为一种有极大商品潜力的珍稀食药用菌，在调节免疫功能、抗癌、 (Agaricus 降血脂、安神等方面具有独特疗效，其菌丝具有较强的富硒能力，且富硒菌丝有机化程度较 高Pl。日前已有很多关于食用菌富硒提取物生物活性的研究报道【4’5】，但对食用菌菌丝体富 硒机理的研究报道较少，本试验通过对富石『i巴西蘑菇菌丝体6种胞外酶(蛋白酶、淀粉酶、 羧甲基纤维素酶、半纤维素酶、漆酶和愈创木酚氧化酶)活性的研究，旨在初步探讨硒对其 茼丝代谢强度的影响，为食用菌富硒保健品的开发和食用菌富硒机理的深入研究提供一定的 理论依据。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种巴西蘑菇菌种由华中农业大学食用菌研究所提供。 1．1．2培养基斜面培养基：PDA培养基；液体摇瓶菌种培养基：去皮马铃薯20％，葡萄糖 培养基：玉米粉5．0％，黄豆粉3．0％葡萄糖1．O％，酵母膏0．5％，硫酸铵0．3％，KH2P040．2％， MgS04·7H200．1％，维生素B10．01％，pH值7。 1．2方法 1．2．1菌种活化培养将巴西蘑菇母种接入新的斜面培养基上，置于恒温培养箱中，于25±l ℃培养7d。 I．2．2摇瓶液体菌种培养250mL摇瓶装量l00mL，接种5块O．5cm2菌块，置于25± l℃，80r·rain1的振荡器中进行一级液体荫种培养，lOd后将一级液体菌种接入二级液 体培养基中(一、二级液体菌种培养均采用液体摇瓶菌种培养基)，二级液体菌种培养 采用250mL摇瓶装量lOOmL，接种量8％，置于254-1℃，80r·min以的振荡器中进行液 体菌种扩大培养，～周后加入15颗无菌玻璃珠，继续振荡培养两天使菌种匀质化得液 体菌种。 ． 1。2．3液体摇瓶培养采用液体发酵培养基，以Na2Se03为Se源，设置一系列的se浓 制得的液体菌种，接种量8％，置于25士l℃，80r·min1的振荡器中进行培养。 1．2．4胞外酶活性测定在液体摇瓶培养过程中，每两天取一定量发酵液于4000r·min。1 冷却离心5min，上清液即为胞外粗酶液。淀粉酶活性测定参照【德】B·施特尔马赫著钱 嘉渊的方法【6】；蛋白酶活性测定用Folin．酚法【7】；羧甲基纤维素酶、半纤维素酶、漆酶 和愈创木酚氧化酶活性测定参照潘迎杰的方法18J。淀粉酶活力单位为：lU=img葡萄 基纤维素酶、半纤维素酶活力单位为：1U．1mg葡萄糖-60min-I．mL一发酵液；漆酶和愈 创木酚酶活力以样品与底物反应30min后的光密度值(∞)表示。 2结果与分析 2．1硒对巴西蘑菇菌丝胞外淀粉酶和蛋白酶活性的影响 福建武夷山 第九届全国药用真菌学术会议暨药用真菌专业组织成立三十周年庆 2009年lO月 从试验结果(表1)可以看出，添加适当浓度的硒对巴西蘑菇菌丝胞外淀粉酶和 蛋白酶活性具有促进作用。当添加硒浓度≤40“g·mL。1时，菌丝胞外蛋白酶和淀粉酶活 性均高于对照(不加硒)。各浓度处理中，淀粉酶以添加硒lOn