钙信号与禽流感病毒H5N1增殖及其诱导MDCK细胞凋亡关系的研究.pdfVIP

全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 牛分枝杆菌Mb2277蛋白的表达及其反应原性初步研究★ ofMb2277ofM．bovisandInitialResearchonits Expression 刘芳1，朱建国¨‘，华修国1，高谦2，严懿嘉1杨志彪1 bovis，MTB)引起的一种人兽共患传染病， 牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium 严重危害人类的健康和畜牧业的发展。为了发掘用于牛分枝杆菌检测的特异性蛋白分子，本研 究利用生物信息学手段从数据库中筛选到了一个推测编码牛分枝杆菌早期分泌蛋白的基因 (Mb2277)， Mb2277基因序列设计引物。利用PCR从牛分支杆菌基因组 进一步根据M．bovis 表达质粒转化到E．coli 25ku蛋白表达条带，进一步用WesternBlot检测显示，表达的Mb2277蛋白具有较强的免疫反应 原性。本研究既可为研究牛分枝杆菌检测方法提供靶标分子，也为进一步研究牛结核病亚单位 疫苗及DNA疫苗提供候选分子。 关键词：牛分枝杆菌；分泌蛋白；Mb2277基因． -／r基金项目：上海市自然科学基金项目 (04zRl4089) 第一作者： 刘芳女上海交通大学硕士研究生，研究方向预防兽医学 ★★通讯作者： 朱建国，研究方向人兽共患病防治email：圣地jg垡§j地：￡血：￡n 钙信号与禽流感病毒H5N1增殖及其诱导MDCK 细胞凋亡关系的研究 CalciumonH5N1Virus andVirus—Induced Signals propagation ofMDCKCells Apoptosis 田勇1’2，郑雪花2，赵立红1，徐彤1’2，邓光存1，乔健1 (1．中国农业大学动物医学院北京100094；2．河北北方学院动物科技学院河北张家口075131) H5N1高致病性禽流感不仅严重危害养禽业，而且可引起人类感染和死亡。钙离子作为一个主 要的细胞内信使，在细胞凋亡和病毒增殖过程中可能起着重要的调控作用，但在H5N1禽流感病毒 (AIV)的研究中未见相关报道。因此，本试验以AIV 导MDCK细胞凋亡，初步探讨钙信号与细胞凋亡和病毒增殖之间的关系，为禽流感发病机制及相关 药物的研究提供科学依据。 1．采用细胞计数法测定MDCK细胞的生长曲线；以Fura．2为钙离子荧光探针，采用荧光分光 光度法测定H5N1 MDCK的生长曲线呈典型的“S”型，倍增时间为32h；正常MDCK细胞胞内[Ca2+】i浓度维持在细胞 BAPTA／AM 断剂)可轻微促进感染细胞早期【cali的升高，但抑$1J随后[Ca2+】i的继续升高；250M (胞内钙离子螯合剂)对感染细胞早期【cali的快速增加具有显著抑制作用，而对后期【ca2+】i增加 mM的金刚烷胺对感染细胞【ca2+】i 的抑制作用减弱；12．5“M三氟拉嗪(TFP，钙调素拮抗剂)和o．1 370 全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 AIV感染MDCK细胞后可能通过升高胞内 的增加均有极显著的抑制作用(P0．01)。说明H5N1 [Ca2+]i来调控病毒增殖和宿主细胞病理性损伤的生物学过程。 2．空斑形成单位(PFU)检测添加多种钙信号通路抑制剂后病毒滴度的动态变化。结果表明无 外源性胰酶的情况下AIV分离株可感染并引起MDCK细胞病变效应(CPE)，12h即有感染性病毒 7 粒子释放到细胞外，48