流式细胞仪生产牛性控冷冻精液技术要点.docVIP

流式细胞仪生产牛性控冷冻精液技术要点 薛建华，吕小青，李艳华，杜欣悦，朱玉林，孙凤俊 （北京奶牛中心延庆基地 102100） 目前，分离动物X、Y精子最有效的方法是应用改进后的流式细胞仪（SX-MoFlo）。它根据X、Y精子DNA含量的差异，借助特异染色剂染色，经过染色的精子通过流式细胞仪时，由于喷嘴产生高频率震动，高速喷射出的液流形成了包含单个X精子或者Y精子的微小液滴逐个与激光交截，精子上的荧光染料Hoechst33342被紫外激光（～350nm）激发会产生蓝色激发光（～460nm）。由于X精子上所含有DNA比Y精子多，结合的荧光染料就多，所激发出的荧光强度比Y精子强。蓝色激发光被正、侧两个光电倍增管接受后放大荧光信号，同时将接受到的信号传入主控机，根据其荧光强度的差别分辨出X精子和Y精子。同时，给被判别的包含单个X精子或者Y精子的微小液滴加载正电荷或者负电荷，携带正电荷或者负电荷精子的液滴在电场力的引导下，分别落入不同的收集容器中，使X精子和Y精子得以分离。 流式细胞仪在精子分离研究中的应用始于Friedrich Otto等对人精子的研究，Johnson等[1]采用该法成功分离了多种动物的精子。分离后X和Y精子的纯度在牛、羊和鹿高达90%以上[2],分离后的精子可用于不同的输精方式，如手术输精(子宫内、输卵管内)、人工授精(子宫深部、子宫颈部)以及体外受精(IVF)和胞质内精