第四章DNA长度多态性（教案） .docVIP

昆 明 医 科 大 学 教 案 课程名称：法医物证学 授课对象：法医专业五年级本科生 讲授题目 第四章 DNA长度多态性 讲授时数 9学时 讲授人：许冰莹 职称： 教授 本课目的、要求 1.掌握DNA指纹、DNA纹印的概念、分析原理、主要步骤；熟悉DNA指纹、DNA纹印的基本特征与局限性。 2.掌握聚合酶链反应（PCR）的基本原理；熟悉PCR反应体系组成、技术特点，了解PCR衍生技术及其应用，了解PCR常见问题及对策； 3.掌握VNTR、STR基本分型技术；了解常用的VNTR、STR基因座。 4.了解RFLP与AMP-FLP技术的优缺点。 本章节重点、难点 重点：1.DNA指纹、DNA纹印的概念、分析原理、主要步骤； 2.聚合酶链反应（PCR）的基本原理、反应体系组成、技术特点； 3.VNTR、STR基本分型技术。 难点：1.DNA指纹、DNA纹印的分析原理； 2.DNA指纹、DNA纹印的基本特征 六、教学方法（请打勾） 传统式、提问式、学导式、病案分析式、直观教学式（幻灯、手术、录像）、自学式、其它： 七、使用教具: 多媒体 八、思考题： 1. 何谓单基因座探针？何谓多基因座探针？ 2. DNA指纹图谱的基本特征是什么？ 3. DNA纹印图谱的基本特征是什么？ 4. 何谓扩增片段长度多态性分析？ 5．比较RFLP与Amp-FLP技术？ 6．STR分型用于法医物证鉴定的主要优点？ 7．何谓多基因座复合扩增 九、要求参考书目及章节： 1.《实用法医学》，郭景元 主编 2.《法医物证学》，吴梅筠 主编 （第一版） 3.《人类DNA遗传标记》，李生斌 著 4.《法医DNA分析》，郑秀芬著 十、讲课内容及时数安排 时间：5min 多媒体 幻灯片 时间：30min 多媒体 幻灯片 时间：60min 多媒体 幻灯片 时间： 10min 多媒体 幻灯片 时间：60min 多媒体 幻灯片 时间：10min 多媒体 幻灯片 时间：20min 多媒体 幻灯片 时间：60min 多媒体 幻灯片 时间：40min 多媒体 幻灯片 时间：60min 多媒体 幻灯片 引言 ：法医DNA分型的研究和应用最初是从长度多态性开始的。 1985年，Jeffreys 首次建立的DNA图谱即是由长短不同的靶DNA 片段组成。早期，法医DNA分析应用限制性片段长度多态性分析技术检测小卫星VNTR位点，构建DNA指纹图谱。进入90年代后，PCR技术逐步取代了限制性片段长度多态性分析技术，成为第二代DNA分型技术。如今，应用PCR扩增微卫星位点是物证鉴定的主流技术。 第一节 限制性内切酶和酶切消化 一、概述 1、概念 限制性内切酶是一类主要分离于原核生物, 能够识别双链DNA(ds-DNA)分子中特定核苷酸序列并将其切断的酶,常常简称为限制酶(restriction enzymes)。 1965年阿尔伯首次从理论上提出了生物体内存在着一种具有切割基因功能的限制性内切酶，并于1968年第次从大肠杆菌中成功分离出I型限制性内切酶；1970年史密斯分离出了II型限制性内切酶；同年内森斯使用II型限制性内切酶首次完成了对基因的切割。??? 限制酶的命名是以该酶来源的原核生物的名称为依据的，即酶的名称的第一个大写字母取自于属名的第一个字母，第二、三个小写字母取自于种名的前两个字母，字母后面的罗马字则是简单地表明该种生物中不同限制酶分离的先后顺序。在正式的出版物中，限制酶名称的前三个字母常用斜体或加下横线表示。Recognition locate at the flanks sequence of the VNTR site, and close to the 5’and 3’end forget segment as much as possible; 2.酶的特异性和活性稳定，不易受酶切反应条件变化影响；The specificity and activity of the Enzyme must be stable, and have little influence of the changes in enzyme reaction conditions; 3.不受基因组DNA甲基化影响。Have no influence of Genomic DNA methylation Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型 DNA底物 双链DNA 双链DNA 双链DNA 识别序列 特异 特异 特异 切割位点 非特定（在识别序列前后100-1000bp范围内） 特定（在识别序列之内或近处） 特定（在识别序列之间25-27bp位置上） 是否可以甲基化 同时具有甲基化作用 不具有甲基化作用 同时具有甲基化作用 四、限制性