实验二SSH法定量测定还原糖QuantitativeDeterminationof.pptVIP

实验三 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖 Exp.3 Quantitative Determination  of Reducing Sugar with3,5-Dinitrosalicylic Acid 一.实验原理 3,5-二硝基水杨酸( 3,5-dinitrosalicylic acid)与还原糖共热后,被还原成棕红色氨基化合物(3-胺基-5-硝基水杨酸)。在一定范围内，还原糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度成一定比例关系，可用分光光度计比色测定。 二.实验用品 1.材料 葡萄糖未知液（每毫克勿超过2毫克） 2.试剂 （1）3.5-二硝基水杨酸试剂 甲液：将6.9g结晶酚溶于15.2ml 10%NaOH溶液中并稀释至69ml，在此溶液内加入6.9gNaHSO3； 乙液：加入255g酒石酸钾钠到300ml 10%NaOH溶液中，再加入880ml 1%3.5-二硝基水杨酸溶液。 甲、乙二溶液混合即得3.5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中，室温下放置7—10天后使用。 （2）0.1%葡萄糖标准溶液 分析纯葡萄糖，105℃干燥到恒重后，准确称取100毫克，用少量蒸馏水溶解并定容至100毫升，冰箱保存备用。 3.仪器设备 试管、吸管、烧杯、721型分光光度计、水浴锅 三、方法和步骤 1、葡萄糖标准曲线制备 （1）取9只大试管，分别按下表加入试剂 将每一试管混匀，在沸水浴中加热5分钟，取出用冷水冷却后，各加入蒸馏水21.5ml摇匀。 （2）在721型分光光度计上测定并分别记下各管的A520nm值。 （3）以葡萄糖含量为横坐标，光吸收值A520nm值为纵坐标作出标准曲线。 2、取样品液0.1～1.3ml两个，取代标准葡萄糖液并按以上步骤操作，将所测得的A520nm值，在标准曲线上查出相应样品中糖的含量并计算百分含量。 四、实验结果 计算糖的含量并计算百分含量。  六.参考文献 现代生物学基础实验指导,林宏辉等,四川大学出版社,2003 * 分别加入1.5ml 水杨酸试剂（即甲、乙混合液） 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 H2O/ml 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖液/ml 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 含糖总量/mg 9 8 7 6 5 4 3 2 1 管号 表1.葡萄糖标准曲线制备 注意事项 比色测定时，取样力求准确 标准曲线斜率适当，不要太大或太小 标准曲线可手绘、坐标纸绘或Excel绘制 五、思考题 比色测定的基本原理是什么？为什么要设计空白管？ *