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周围神经组织工程研究 刘小林中山大学附属第一医院显微创伤骨科 随着当今社会经济的快速发展，各种意外事故引起的周围神经损伤日益多见。周围神经损伤患 者多为青壮年劳动力，且常遗留终身残疾，对个人、家庭、社会都形成了沉重负担。周围神经损伤 的疗效不理想，主要原因之一是缺乏合适的材料来修复神经损伤后出现的神经缺损。自体神经移植 是目前临床上最常用的修复周围神经缺损的材料，但所能切除的神经均为纤细是感觉神经，数量也 有限，无法满足修复长段主干神经的需求，而且还会造成一系列供区并发症。因此，有必要研制新 型的神经移植物。 理想化的神经移植物应具有良好的物理性能和生物性能，来源丰富，使用方便。良好的物理性 能是指移植物具有与天然神经相似的空间结构，可引导和支持再生神经的生长。良好的生物性能是 指移植物具有生物活性，含有细胞、细胞外基质和各种因子，可为神经再生提供良好的微环境。 本系列研究的目的就是研制一种具有仿生结构和生物活性的神经移植物。研究思路是运用组织 工程学的原理和方法，首先制备出仿生化支架，并分离、培养出具有神经营养活性的种子细胞，然 后将种子细胞种植在支架内，在体外构建出称之为组织工程化神经移植物的神经修复材料。 一、支架材料相关研究 1．去细胞神经支架的制备及其结构与成份分析 用化学药剂分别对大鼠、猕猴和人的周围神经作萃取处理，经常规组织学、免疫组织化学和电 子显微镜检查表明，萃取后的神经不含细胞，髓鞘、神经轴突等被清除，而胶原纤维、层粘连蛋白 等细胞外基质得以保留，神经基底膜管也保持完整，成为具有仿生结构的去细胞神经支架。 2．去细胞神经支架血管化过程研究 将大鼠去细胞神经支架植入体内，分别在术后第7、10、14、28天和第3个月观察支架的血管 化过程，发现在第7天已有新生血管进入支架，随着时间的延长，支架内新生血管逐渐增多，第28 天时，新生血管遍布整个支架，第3个月时可见完整的微血管网形成，其血管化过程与自体神经移 植比较无显著性差异。 3．去细胞神经支架与种子细胞的相互作用 将种子细胞植入去细胞神经支架，并在体外进行共培养，发现支架可为种子细胞的粘附、迁移 提供良好的支持。种子细胞可沿着支架内神经基底膜管的方向迁移，形成类似Bungner带样结构。 4．去细胞神经支架免疫原性研究 在兔皮下植入人去细胞神经支架，于3次免疫后第5周，取外周血进行血液学、血清抗体、T 细胞弧型分析以及淋巴细胞增殖试验，结果发现在兔皮下植入人去细胞神经支架对兔的细胞免疫和 体液免疫无明显影响，未见免疫排斥反应，提示去细胞神经支架的免疫原性极低。 5．去细胞神经支架生物安全性研究 取人去细胞神经支架，按照国家标准规定的方法进行无菌试验、细菌内毒素试验、细胞毒性试 验、致敏试验、遗传毒性试验和溶血试验，结果表明去细胞神经支架符合国家关于体内植入材料的 生物安全性标准。 6．去细胞神经支架保存条件研究 去细胞神经用保存液浸泡后，在4。C和--20℃条件下保存长达180天，其理化性能和组织学特 性与新鲜制备的去细胞神经比较无显著性差异。 【结论】 16 1．化学萃取法可清除周围神经内的细胞，保留完整的神经基底膜管，明显降低其免疫原性。2．去 细胞神经支架具有类似天然神经的骨架结构，可支持种子细胞的种植与迁移，植入体内可在短期内 再血管化。 3．去细胞神经支架具有良好的生物安全性，在合适条件下可长期保存。 二、种子细胞相关研究 1．骨髓间充质干细胞的诱导分化 从大鼠骨髓中分离出骨锈间充质干细胞，在体外经一系列化学药剂和生长因子的序贯处理后， 骨髓间充质干细胞可表达S．100、GFAP等许旺细胞标志物。将骨髓间充质干细胞与激活态许旺细胞 置业同一培养体系中进行共培养。骨髓间充质干细胞同样可表达许旺细胞标志物。本研究提示骨髓 间充质干细胞具有向许旺细胞分化的潜能，采用化学诱导法和生物诱导法均可使骨髓间充质干细胞 分化为类许旺细胞。 2．脂肪干细胞的诱导分化 从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞，在体外经一系列化学药剂和生长因子的序贯处理后，脂 肪干细胞可表达S．100、GFAP等许旺细胞标志物，经诱导的脂肪干细胞与神经元细胞共培养，可促 进神经元突起的生长，其作用与许旺细胞比较无显著差异，提示脂肪干细胞具有分化为许旺细胞的 潜能，经诱导的脂肪干