单克隆抗体的制备42598.docVIP

中学生物学习中的筛选问题例析 已发表 “筛选”是生物学中培育生物新类型常用的手段，第一次是选出杂交瘤细胞(用选择性培养基);??第2次是进一步选出能产生抗体的杂交瘤细胞. ? ?? 利用杂交瘤技术制备的基本原理是根据以下三个原则： ??? 淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说，即一种克隆只产生一种抗体； ???细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持双方亲代细胞的特性； 利用代谢缺陷补救机理筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养增殖，制备所需的 解析：（1）在细胞融合过程中两个细胞之间是随机进行的，两个骨髓瘤细胞之间或两个淋巴细胞之间或两个不同的细胞之间是随机进行的，因此有三种融合方式。 （2）试管中细胞共有5种(只考虑两个细胞的融合)：效应B淋巴细胞及其自身融合的细胞、鼠骨髓瘤细胞及其自身融合的细胞、杂交瘤细胞。因为效应B淋巴细胞中DNA的复制有D途径和S途径，但本身不会连续增殖，故培养一段时间后效应B淋巴细胞及其自身融合的细胞全部死亡；鼠骨髓瘤细胞内DNA的复制只有D途径，而D途径可以被氨基嘌呤阻断，故加入氨基嘌呤后培养一段时间，鼠骨髓瘤细胞及其自身融合的细胞也会死亡；只有效应B淋巴细胞和鼠骨髓瘤细胞结合后产生的杂交瘤细胞既可以无限繁殖，又具有S途径，所以可以连续繁殖而被筛选出来。 答案：（1）2； （2）培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。 2 基因工程中的筛选问题 在基因工程中，利用运载体上的标记基因可以筛选出导入了目的基因的受体细胞。标记基因常有抗抗生素基因或荧光蛋白基因等。 例2 研究人员想将生长激素基因通过质粒介导进入大肠杆菌细胞内，以表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因不插入到基因A、B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。则筛选获得“工程菌”的培养基中的抗生素首先应该 A．仅有链霉素 B．仅有抗氨苄青霉素 C．同时含链霉素和抗氨苄青霉素 D．无链霉素和抗氨苄青霉素 解析：在基因工程中，目的基因是否导入受体细胞中，主要根据载体质粒上的标记基因确定的。根据题意，目的基因没有插入到基因A、B中，说明这两个标记基因没有被破坏，C 3 营养缺陷型菌株的筛选 营养缺陷型突变株的筛抗生素法 某些抗生素能杀死生长繁殖着的微生物，而对处于休止状态的微生物无杀伤作用。用加有青霉素的培养基来选择细菌的营养缺陷型就是由于青霉素是细菌细胞壁的合成抑制剂，利用其可杀死正在繁殖的细菌的性质，菌丝过滤法适用于放线菌、霉菌等丝状微生物。在基本培养基中野生型孢子能萌发长成菌丝体，而营养缺陷型孢子则不生长。将经诱变处理的孢子接种于液态基本培养基中，振荡培养lOh—12h，使原养型萌发(以肉眼刚能看见菌丝为度)，然后以滤纸、棉花或玻璃过滤漏斗过滤，菌丝被滤除，未萌发的缺陷型孢子能顺利通过，从而达到富集营养缺陷型的目的。逐个测定法(点种法) 把经诱变处理并淘汰野生型后的菌液在完全培养基上涂布分离，将培养后长出的每一个菌落分别点种在基本培养基和另一个完全培养基上，凡在基本培养基上不能生长而在完全培养基的相应位置上能生长的菌落，表明其为营养缺陷型。 夹层培养法经诱变处理后的菌液，稀释后与基本培养基混匀并倾入平皿中，待凝固后，再加上一薄层不含菌的基本培养基。培养后在皿底将长出的菌落做上标记。然后加上一层完全培养基，再经培养后，新出现的菌落多数是营养缺陷型。此法适用于兼性厌氧的细菌。影印法将丝绒包在直径小于平皿的圆柱台上固定，作为影印接种工具，灭菌备用。将经诱变处理并淘汰野生型的菌液涂布于完全培养基表面上，培养待长出菌落后，用影印接种工具在此平板上轻按一下，然后在另一基本培养基平板上按一下。经培养后在基本培养基上不长而在完全培养基的相应部位上生长的菌落，为营养缺陷型 。BrdU是一种嘧啶类似物，酵母菌在繁殖过程中摄取BrdU并替代胸腺嘧啶脱氧核苷酸的位置掺入到新合成的DNA链中。含BrdU的DNA的酵母菌因其比正常的DNA更容易被紫外线破坏而死亡，不繁殖的酵母菌由于不能利用BrdU，其DNA对紫外线不敏感而存活下来。如果上图2中的营养缺陷型是甘氨酸营养缺陷突变型，利用上述原理如何将突变型菌株从野生型菌株中筛选出来并大量繁殖？请简要叙述实验方案。 ① ②